反相色譜柱為色譜柱提供方便,、經濟和有效的保護,,延長了色譜柱的壽命,分析結果的重現(xiàn)性,。隨著使用時間的增加,,高效液相色譜柱分離效能下降,柱壓增高,,其原因主要是由于色譜柱進口段的少量填料被污染引起的,,而色譜柱整個柱床并未被破壞,使用保護柱,,相當于在色譜柱前增加了一段額外的填料,,起到了保護整個色譜柱的作用。
反相色譜柱特點:
采用高度可控的單分子層形成和封尾技術,;
高的柱間重現(xiàn)性,;
高的選擇性和分離效率;
適合分離酸性,、中性和堿性化合物,,以及許多藥物和多肽等。
反相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點:
1.避免使用鹽酸鹽,,鹽酸鹽對鋼質有腐蝕作用,;
2.緩沖液要現(xiàn)配現(xiàn)用,往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液,,隔天或放置長時間實驗時會發(fā)生很多怪現(xiàn)象,;
3.使用緩沖液要及時掌握pH范圍,,做到胸中有數(shù);
4.清洗液路和柱子時,,有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗,;
5.長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出,若有白色鹽類析出,,定期用10%硝酸沖洗液路可以避免液路的堵塞,;
6.反相色譜柱選擇緩沖液要用合適的試劑,避免不純的鹽類造成不必要的麻煩,;
過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,,但是不含緩沖鹽的溶液。
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