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鬼筆環(huán)肽染色實(shí)驗(yàn)
一、實(shí)驗(yàn)介紹
鬼筆環(huán)肽(phalloidin)可特異性與細(xì)胞內(nèi)聚合微絲中的絲狀肌動(dòng)蛋F-actin結(jié)合,，通過藕聯(lián)的熒光素分子,，從而顯示微絲骨架在細(xì)胞中的分布。與抗體相比,，鬼筆環(huán)肽無物種限制,，染色特異性及強(qiáng)，染色區(qū)和未染色區(qū)對(duì)比性非常清晰,，而且標(biāo)記后的肌動(dòng)蛋白許多生理特性都得以維持,。也適用于甲醛固定和去垢劑通透處理后的組織或細(xì)胞樣本。
二,、特點(diǎn)及適用范圍
細(xì)胞學(xué),、生物學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研,。
三,、細(xì)胞爬片鬼筆環(huán)肽染色實(shí)驗(yàn)步驟
1.在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min,；
2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min,，PBS浸洗玻片3次，每次3min,；
3.滴加稀釋好的鬼筆環(huán)肽染液（5μg/mL）,，37℃孵育1 h，PBST清洗3次,，每次3 min,；
4.滴加DAPI避光孵育5min，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核,，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI,；
5.用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片,，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示
五、送樣運(yùn)輸要求：
按細(xì)胞準(zhǔn)備流程4%的多聚甲醛固定固定細(xì)胞15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡,，離心管封口膜封好，4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室
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