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大鼠糖尿病模型科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹

時間:2024/9/24閱讀:128
大鼠糖尿病模型


應(yīng)用簡介
       糖尿病(diabetes mellitus ,DM)已成為嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題。DM及其并發(fā)癥不僅嚴(yán)重影響糖尿病患者的生活質(zhì)量,同時也是致殘、致死的重要原因。因此,建立合適的糖尿病動物模型,闡明DM及其并發(fā)癥的發(fā)病機制就顯得尤為重要,。
大鼠糖尿病模型
       一般糖尿病動物模型制備方法主要有:手術(shù)切除胰腺、化學(xué)藥物誘導(dǎo)、自發(fā)性糖尿病動物模型,、轉(zhuǎn)基因動物等。此方法為化學(xué)藥物誘發(fā)的DM模型:采用鏈脲佐菌素腹腔注射可誘發(fā)DM,,鏈脲佐菌素(streptozotocin STZ)的參考劑量為50~150mg/kg,。STZ是一種含亞硝基的化合物,進入體內(nèi)可通過以下機制特異性地破壞胰島β細(xì)胞:
       (1) STZ直接破壞胰島β細(xì)胞:主要見于注射大劑量STZ后。STZ注射后可引起β細(xì)胞內(nèi)輔酶I(NAD)的濃度下降,NAD依賴性能量和蛋白質(zhì)代謝停止,導(dǎo)致β細(xì)胞死亡;
       (2) 通過誘導(dǎo)一氧化氮(NO)的合成,破壞胰島β細(xì)胞;
       (3)STZ激活自身免疫過程,進一步導(dǎo)致β細(xì)胞的損害:小劑量注射STZ可破壞少量胰島β細(xì)胞,死亡的胰島β細(xì)胞可作為抗原被巨噬細(xì)胞吞噬,產(chǎn)生TH1刺激因子,使TH1細(xì)胞系占優(yōu)勢而產(chǎn)生IL-2及IFN-γ,在胰島局部促使炎性細(xì)胞浸潤,并活化釋放IL-1,、TNF-α,、IFN-γ、NO和H2O2等物質(zhì)殺傷細(xì)胞,。死亡細(xì)胞又可作為自身抗原,再次遞呈給抗原遞呈細(xì)胞進行處理,釋放細(xì)胞因子,放大細(xì)胞損傷效應(yīng),最終誘發(fā)DM,。
實驗方法
       主要試劑及配制方法
       檸檬酸、檸檬酸三鈉,、鏈脲佐霉素(Streptozocin, STZ)
       1. 檸檬酸鈉緩沖液配制:將2.10 g檸檬酸加入雙蒸水100 ml配成檸檬酸母液,, 稱為A液; 將2.94g檸檬酸三鈉加入雙蒸水100 ml配成檸檬酸鈉母液,,稱為B液,; 將A、B液按1:1.32比例混合,,pH計測定pH值,,調(diào)定溶液pH=4.0,即是所需配制STZ的0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液,。
       2. STZ溶液的配制:將STZ溶于0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液中,,新鮮配制成10 mg/mL濃度的STZ溶液,,并用0.22μm濾菌器過濾除菌。注意避光配制,,現(xiàn)用,。
實驗流程:


應(yīng)用:疾病模型
模型評價
       1. 大體觀察:正常組大鼠體型適中,精神狀態(tài)良好,,動作自如,,反應(yīng)靈敏,毛發(fā)平伏有光澤,。而糖尿病大鼠體重變輕,,精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,,毛豎無光澤,,動作遲緩,弓背捲體,,尿量顯著增加,。糖尿病大鼠較正常組體重顯著減輕,心臟系數(shù),、肝臟系數(shù)較正常組有顯著增加,,且有統(tǒng)計學(xué)意義。
       2. 空腹血糖,、甘油三酯和總膽固醇水平的變化:正常對照組的空腹血糖,、甘油三酯和總膽固醇水平在實驗前后均無顯著差異;DM組的空腹血糖,、甘油三酯和總膽固醇水平顯著高于對照組,。
組織病理學(xué)
       1.糖尿病大鼠心臟組織形態(tài)學(xué)的變化
       經(jīng)HE染色可見正常對照組大鼠心肌纖維排列整齊,致密,,結(jié)構(gòu)清晰,,細(xì)胞核染色質(zhì)分布均勻,細(xì)胞外間質(zhì)較少,,微血管結(jié)構(gòu)正常,,可見少量成纖維細(xì)胞,間質(zhì)無明顯的炎癥細(xì)胞浸潤,;DM模型組大鼠心肌纖維排列紊亂,,心肌細(xì)胞肥大,細(xì)胞間隙增大,,結(jié)構(gòu)不清晰,,有的細(xì)胞核膜皺縮,核固縮,,并有炎癥細(xì)胞浸潤,,肌細(xì)胞間也可見成纖維細(xì)胞浸潤,。
       2. 糖尿病大腎臟組織形態(tài)學(xué)的變化
       HE染色顯示,DM組大鼠腎小球肥大增生,,腎小球系膜基膜增厚,腎小管空泡變性,,胞質(zhì)空亮,。
       3.糖尿病大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)的變化
       經(jīng)油紅O染色可見DM組大鼠肝內(nèi)脂滴較大,紅色脂滴明顯,,肝臟可見顯著的脂質(zhì)沉積,。
       4.糖尿病大鼠肺臟組織形態(tài)學(xué)的變化
       HE染色顯示,對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰,,肺泡分布均勾,,肺泡隔、支氣管
       壁完整,,肺間質(zhì)分布均勻,,少見炎性細(xì)胞浸潤;DM組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂,,部分肺泡腔為縮,、塌陷,可見肺大泡,,支氣管壁增厚,,肺間質(zhì)和血管周圍細(xì)胞外基
       質(zhì)增多,成纖維細(xì)胞增多,,并有大量炎癥細(xì)胞浸潤,。


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