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產(chǎn)品說明

匯智泰康公司的致瀉性大腸埃希氏菌多重PCR檢測試劑盒可同時檢測腸道致病性大腸埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli.，EPEC),，腸道侵襲性大腸埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli.，EIEC),，產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia coli.,，ETEC)，腸道出血性大腸埃希氏菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli.,，EHEC),，和腸道集聚性大腸埃希氏菌(Enteroaggregative Escherichia coli.，EAEC)5種常見的致瀉大腸埃希氏菌,。

產(chǎn)品組成 （50次,，25 µL PCR）

* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP,，含MgCl₂的PCR優(yōu)化反應緩沖液,。使用頻率高時一旦融解請于4^oC保存或分裝保存。

儲存條件

-20^oC長期保存,。多次反復凍融會降低檢測效率,。

使用說明

• DNA樣本處理、反應體系配制,、核酸擴增和結果鑒定等各步驟應分域進行,，以避免交叉污染。
• 細菌基因組DNA可使用市售試劑盒提取，也可按以下方法快速制備：

從平板上挑取適量菌落,，加入含有200 µL ddH₂O的滅菌離心管中,，渦旋震

• 菌液煮沸10 min，冷卻至室溫后,，13,000 rpm離心2 min,。
• 將上清移至新離心管中，即得可用于本試劑盒檢測的細菌DNA模板,。

• PCR反應液配制：

2 X Master Mix 12.5 µL

Primer Mix 2.5µL

陽性對照/樣品DNA 2 µL

H₂O 8 µL

反應終體積 25µL

• PCR反應條件：

94^oC 預變性 5min

94 ^oC 變性 30 sec

30個循環(huán) 63 ^oC 復性 30 sec

72 ^oC 延伸 1.5min

72 ^oC 延伸  5 min

• PCR反應完成后加入loading buffer,，用無核酸染料瓊脂糖凝膠（2%）電泳檢測15 µL PCR擴增產(chǎn)物 (120 V，45 min),。電泳完后泡膠染色30min,。5種致瀉大腸埃希氏菌的檢測結果如下圖所示。

6.  注意事項：

試劑使用前建議短暫離心后開啟,。

PCR反應液請在冰中配制,，以增強檢測的特異性。