體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)常見(jiàn)問(wèn)題與解答
—熱點(diǎn)問(wèn)題—
第一題 一張玻片可觀察到200個(gè)中期分裂相嗎,？如果不夠，該如何處理,？
大多數(shù)情況下,，一張玻片很難找到200個(gè)可用于分析的中期分裂相，建議同一個(gè)劑量組多制作一些玻片，本公司一個(gè)劑量組通常會(huì)制作至少4張玻片,，以保證足夠中期分裂相細(xì)胞可供分析,。
第二題 如何辨別細(xì)胞是否處于中期分裂相？
中期分裂相細(xì)胞染色體數(shù)目,、形態(tài)比較固定,，染色體包含兩條染色單體，具體見(jiàn)下圖：
第三題 有絲分裂指數(shù)測(cè)定的意義是什么,？
中期分裂相指數(shù)是指所觀察的細(xì)胞中中期分裂相細(xì)胞的占比,，是一項(xiàng)反映細(xì)胞增殖程度的指標(biāo)。
第四題 油鏡如何使用,？是否要將油鏡鏡頭整個(gè)浸入油中,？
油鏡的使用需要搭配香柏油，香柏油與玻璃的折光率相近,，光線穿過(guò)載玻片進(jìn)入香柏油發(fā)生折射較少,，而進(jìn)入油鏡的光較多，視野較為明亮,。油鏡使用時(shí),，需要將油鏡鏡頭浸入香柏油中，并與玻片接觸,，使用結(jié)束后使用少量二甲苯擦拭干凈鏡頭,。
第五題 中期分裂相細(xì)胞少是什么原因?qū)е拢咳绾蝺?yōu)化,？
中期分裂相細(xì)胞少的原因如下：
（1）秋水仙素的劑量過(guò)小,，作用時(shí)間過(guò)短；
（2）重懸時(shí)固定液量過(guò)大,，細(xì)胞密度過(guò)低,。
優(yōu)化策略：
（1）秋水仙素劑量大，則作用時(shí)間短,；
（2）秋水仙素劑量小,，則適當(dāng)延長(zhǎng)作用時(shí)間，請(qǐng)選擇適宜的劑量和時(shí)間,；
（3）根據(jù)細(xì)胞的收集量確定重懸體積,；
（4）適當(dāng)增加滴片的數(shù)量。
第六題 染色體聚集可能是由哪些原因?qū)е拢?/span>
染色體聚集的可能原因如下：
（1）秋水仙素用量過(guò)多,，導(dǎo)致染色體的過(guò)度濃縮,；
（2）低滲時(shí)間不足，導(dǎo)致染色體聚集在一起分散不開(kāi),；
（3）細(xì)胞懸液未充分吹打均勻,；
（4）載玻片未進(jìn)行預(yù)冷,，玻片表面張力不夠；
（5）滴片高度不夠,。
第七題 染色體分散過(guò)度可能是由哪些原因?qū)е拢?/span>
染色體分散過(guò)度的根本原因就是細(xì)胞膜破裂,。主要由以下可能：
（1）低滲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；
（2）離心速度過(guò)高,；
（3）細(xì)胞操作過(guò)程不注意,，操作過(guò)度；
（4）滴片距離過(guò)高,。
第八題 染色體畸變?cè)囼?yàn)閱片需要配套什么樣的顯微鏡,？如何操作？
染色體畸變?cè)囼?yàn)使用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理細(xì)胞,，使細(xì)胞停止在中期分裂相,，此時(shí)染色體形態(tài)、數(shù)目都比較固定,，使用普通生物顯微鏡即可進(jìn)行染色體結(jié)構(gòu)畸變觀察,。先于低倍鏡下尋找背景清晰、分散良好,、染色體收縮適中的中期分裂相細(xì)胞,，再于油鏡下進(jìn)行染色體畸變觀察并記錄。
第九題 玻片想要長(zhǎng)期保存,，需要如何處理,？
如果玻片要長(zhǎng)期保存，必須要做好封片（可使用中性樹(shù)脂膠并加蓋玻片）,，并置于陰涼干燥處保存,。
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