體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)常見問題與解答
—熱點(diǎn)問題—
第一題 一張玻片可觀察到200個中期分裂相嗎？如果不夠,，該如何處理,？
大多數(shù)情況下，一張玻片很難找到200個可用于分析的中期分裂相,，建議同一個劑量組多制作一些玻片,，本公司一個劑量組通常會制作至少4張玻片，以保證足夠中期分裂相細(xì)胞可供分析,。
第二題 如何辨別細(xì)胞是否處于中期分裂相,？
中期分裂相細(xì)胞染色體數(shù)目、形態(tài)比較固定,，染色體包含兩條染色單體,，具體見下圖：
第三題 有絲分裂指數(shù)測定的意義是什么？
中期分裂相指數(shù)是指所觀察的細(xì)胞中中期分裂相細(xì)胞的占比,，是一項(xiàng)反映細(xì)胞增殖程度的指標(biāo),。
第四題 油鏡如何使用？是否要將油鏡鏡頭整個浸入油中,？
油鏡的使用需要搭配香柏油,，香柏油與玻璃的折光率相近，光線穿過載玻片進(jìn)入香柏油發(fā)生折射較少,，而進(jìn)入油鏡的光較多,，視野較為明亮。油鏡使用時，需要將油鏡鏡頭浸入香柏油中,，并與玻片接觸,，使用結(jié)束后使用少量二甲苯擦拭干凈鏡頭。
第五題 中期分裂相細(xì)胞少是什么原因?qū)е?？如何?yōu)化,？
中期分裂相細(xì)胞少的原因如下：
（1）秋水仙素的劑量過小，作用時間過短,；
（2）重懸時固定液量過大,，細(xì)胞密度過低。
優(yōu)化策略：
（1）秋水仙素劑量大,，則作用時間短,；
（2）秋水仙素劑量小，則適當(dāng)延長作用時間,，請選擇適宜的劑量和時間,；
（3）根據(jù)細(xì)胞的收集量確定重懸體積；
（4）適當(dāng)增加滴片的數(shù)量,。
第六題 染色體聚集可能是由哪些原因?qū)е拢?/span>
染色體聚集的可能原因如下：
（1）秋水仙素用量過多,，導(dǎo)致染色體的過度濃縮；
（2）低滲時間不足,，導(dǎo)致染色體聚集在一起分散不開,；
（3）細(xì)胞懸液未充分吹打均勻；
（4）載玻片未進(jìn)行預(yù)冷,，玻片表面張力不夠,；
（5）滴片高度不夠。
第七題 染色體分散過度可能是由哪些原因?qū)е拢?/span>
染色體分散過度的根本原因就是細(xì)胞膜破裂,。主要由以下可能：
（1）低滲時間過長,；
（2）離心速度過高；
（3）細(xì)胞操作過程不注意,，操作過度,；
（4）滴片距離過高。
第八題 染色體畸變試驗(yàn)閱片需要配套什么樣的顯微鏡,？如何操作,？
染色體畸變試驗(yàn)使用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理細(xì)胞，使細(xì)胞停止在中期分裂相,，此時染色體形態(tài),、數(shù)目都比較固定，使用普通生物顯微鏡即可進(jìn)行染色體結(jié)構(gòu)畸變觀察,。先于低倍鏡下尋找背景清晰,、分散良好、染色體收縮適中的中期分裂相細(xì)胞,，再于油鏡下進(jìn)行染色體畸變觀察并記錄,。
第九題 玻片想要長期保存，需要如何處理,？
如果玻片要長期保存,，必須要做好封片（可使用中性樹脂膠并加蓋玻片），并置于陰涼干燥處保存,。
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