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原代肝細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與應(yīng)用

閱讀:2570      發(fā)布時間:2022-7-11
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肝臟是藥物代謝的重要器官,,體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ),。常用的體外模型有肝微粒體、肝S9,、肝胞質(zhì)液,、原代肝細(xì)胞、肝組織切片,、重組人代謝酶等,。其中,原代肝細(xì)胞因具有較好的體外試驗(yàn)重現(xiàn)性,,基本維持了肝臟的代謝功能,,特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平,成為了體外藥物試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)",,廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)研究中,。


1    原代肝細(xì)胞及其應(yīng)用


原代肝細(xì)胞(Primary hepatocytes)是指從動物肝臟取出后立即培養(yǎng)的肝細(xì)胞。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型,,具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點(diǎn):


①與體內(nèi)環(huán)境保持一致,,酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度,可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性,;


②較好保留和維持了肝細(xì)胞的完整形態(tài)和肝細(xì)胞體外代謝活性,,真實(shí)反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。


隨著技術(shù)水平的不斷提高,,原代培養(yǎng)的動物和人肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究:


①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學(xué)的研究,;


②評價藥物和外源性物質(zhì)對肝臟中細(xì)胞色素P450酶誘導(dǎo)作用并探討其誘導(dǎo)機(jī)制;


③預(yù)測和解釋藥物與藥物之間的相互作用,;


④研究藥物的細(xì)胞毒性等,。


2    原代肝細(xì)胞分離


肝細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞,具有豐富的酶系及多種特異性功能,,被廣泛用于生物化學(xué),、實(shí)驗(yàn)性肝損傷、藥代動力學(xué),、 毒理學(xué)和致癌作用等研究,。然而,,分離并培養(yǎng)出高活性的原代肝細(xì)胞成為了關(guān)鍵步驟,分離的原代肝細(xì)胞在體外是否能夠存活


目前,,原代肝細(xì)胞分離常用的方法有直接剪切法,、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。其中,,兩步膠原酶灌流法因其對肝細(xì)胞損傷作用較小,,在膠原酶消化細(xì)胞前使用了螯合劑,提高了肝細(xì)胞的產(chǎn)量和活力,,分離的肝細(xì)胞數(shù)量多且活力好,,成為了分離原代肝細(xì)胞的經(jīng)典方法,。


兩步膠原酶灌注法先使用無鈣灌流液灌注,,無鈣灌流液作為預(yù)灌液,可以將肝臟內(nèi)的殘留血液灌注出,,除去或者減少細(xì)胞間的鈣離子,,以減少細(xì)胞間的粘著力。經(jīng)無鈣灌流液灌注后再使用含酶灌流液進(jìn)行灌注把組織中的細(xì)胞釋放出來,。膠原酶在消化肝的同時解除了細(xì)胞間接觸抑制或活化了潛在的蛋白激酶,、生長因子或受體,使肝細(xì)胞能逐漸適應(yīng)消化分離過程中所發(fā)生的細(xì)胞,、外環(huán)境及細(xì)胞的各種改變,,這些改變對離體肝細(xì)胞修復(fù)、生長及功能有重要的促進(jìn)作用,,有利于肝細(xì)胞的培養(yǎng),。


3    IPHASE原代肝細(xì)胞產(chǎn)品


IPHASE/匯智和源憑借多年的技術(shù)能力和技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的積累,不斷摸索和優(yōu)化原代肝細(xì)胞分離過程,,現(xiàn)已形成猴,、犬、大鼠,、小鼠等原代肝細(xì)胞產(chǎn)品,。


4    IPHASE原代肝細(xì)胞優(yōu)勢


l  安全性


IPHASE/匯智和源分離原代肝細(xì)胞所用動物均經(jīng)過傳染源檢測,使用安全,、更放心,。


l  純度高


IPHASE/匯智和源生產(chǎn)的原代肝細(xì)胞經(jīng)分離純化后純度高,狀態(tài)好,。


l  活性好


IPHASE/匯智和源生產(chǎn)的原代肝細(xì)胞,,復(fù)蘇存活率可達(dá)90%以上,所有種屬原代肝細(xì)胞均經(jīng)過體外代謝質(zhì)控,,代謝活性強(qiáng),。


5    相關(guān)產(chǎn)品

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匯智和源,,致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research",。

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