對于多肽的一些常用的使用知識,,對此類信息感興趣的可千萬不要錯過了,話不多說下面讓我們一起來了解一下吧,。
1,、保存
大多數(shù)多肽在-20℃很穩(wěn)定,,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前,,冷凍干燥多肽可以放于室溫,。這將是濕度影響減少,當(dāng)無法冷凍干燥時,,方法是以小的工作樣量存放,。
對于含Cys,MetorTrP的多肽,脫氧緩沖劑對其溶解不可少,,因為這種多肽可易空氣氧化,,在封瓶前,慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用,。含Gln或Asn的多肽也容易降解,,所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比,生命期有限,。
2,、溶解性
大多肽的道選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對于堿性或酸性多肽的溶解很重要,。這些方法不溶的多肽,,需要DMF、脲,、guanidiniamchloride或acetonitnle來溶解,,這些溶劑可能某些實驗有副作用。所以我們建議設(shè)計多肽時要加注意,。
殘基Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe和Val將全增加多肽的溶解難度,。
3、保存操作
包裝1mg或更少的多肽按凈重包裝,,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水,。例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%,,在1mg樣品中,,那么瓶中毛重是1.25mg。
大量的多肽以毛重算,。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水,,例如,25mg樣品中肽百分比為90%,,那么,,實際肽量為25mg×90%=22.5mg
不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%,,而肽含量相關(guān)帶電基團(如Arg,Lys)的抗離子量和肽新水性決定,。這是合成肽的本身特性,。
4、凍干肽的保存
所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱,,最好為-20℃,。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。
5,、肽溶液的保存
溶液肽遠比凍干形式不穩(wěn)定,,溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7),-20℃保存的,為避免樣品的反復(fù)凍融,,最好分成小樣存放,。一份樣品融凍后未用完,應(yīng)扔掉,,細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩,,為克服此,肽應(yīng)溶于無菌水,,或肽溶液用0.2μM濾膜過濾,。
6,、多肽的重建和操作
多數(shù)肽溶于無菌蒸溜水,。初次溶解時,要注意使初始濃度比要求濃度大,,如果多肽僅有限溶解性,,這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。
如果多肽在水中的溶解性有限,,有幾種選擇可幫助溶解:
對堿性肽用稀乙酸(含Arg,Lys,His)
酸性肽用稀氨水(含Asp,Glu)
對極疏水的肽用10%有機修飾物(Acetonitnile,Methanol)
極不溶的肽用DM50或DMF
guaniclinehydrochloride或脲的濃溶液也很有用,,與上述方法合用,聲處理也是溶解多肽的有效手段,。
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