蛋白酶K是一種從白色念珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶,,具有很高的比活性,,是DNA提取的關(guān)鍵試劑。該酶在較廣的pH范圍(4?12.5)內(nèi)及高溫 (50?70°C)均有活性,,用于質(zhì)?;蚧蚪M DNA、RNA的分離,。在DNA提取中,,主要作用是酶解與核酸結(jié)合的組蛋白,使 DNA游離在溶液中,,隨后用不同方法進(jìn)行抽提,,除去雜質(zhì),收集DNA。EDTA等螯合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活,。蛋白酶K貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml,。 貯存于-20°C。蛋白酶K在核酸純化,、絲綢,、醫(yī)藥、食品和釀造等領(lǐng)域都有著重要的應(yīng)用,。由于儲存和運輸需要低溫,,而且反復(fù)凍融對活性也有影響,因此有必要開發(fā)一種可以長期穩(wěn)定保存蛋白酶K的方法,。
冷凍干燥技術(shù)是把含有水分的物料預(yù)*行降溫,,凍結(jié)成固體,在一定的真空條件下使冰升華,,以水蒸氣形式除去,,通過二次干燥獲得低含水量的固體干燥物。
冷凍干燥是在低溫,、真空狀態(tài)下完成對制品的脫水干燥過程的,,相對于其他干燥方式具有很多優(yōu)點,,目前在生物制品,、藥品的干燥方法中是主要選擇。主要體現(xiàn)在以下幾個方面:樣品預(yù)凍前完成全體系的分裝,,保證劑量的精確性,;低溫和真空下干燥,保證物質(zhì)本身的理化性質(zhì)和生物特性,;固態(tài)的冰晶升華成為水蒸氣后形成的疏松多孔結(jié)構(gòu),,凍干制品具有良好的速溶性、復(fù)水性,;脫水*,,重量輕,方便儲存和運輸,,可以常溫運輸和儲存,。
但是由于凍干過程是一個復(fù)雜的相變過程,蛋白酶K作為一種蛋白質(zhì),,在冷凍干燥過程中極易受到凍干過程的低溫效應(yīng),、凍結(jié)效應(yīng)和脫水效應(yīng)的影響,最終導(dǎo)致其酶活性的降低甚至失活,。因此為了減少蛋白酶K酶活性在凍干過程中的損傷,,篩選合適的凍干保護(hù)劑和合適的凍干工藝尤為重要。
蛋白酶K常用保護(hù)劑蔗糖,、海藻糖,、甘露醇,、右旋糖苷、肌醇,、甘氨酸,、L絲氨酸、α丙氨酸,、PEG,、BSA、EDTA,、ca離子等,。各種保護(hù)劑可以相互組合或者采用單一組分加合適的緩沖液等。不同的保護(hù)劑配方行成的固形物含量不一樣,,所以關(guān)鍵溫度不同,,采用的凍干工藝技術(shù)路線也不一樣。凍干工藝可以采用一步升華干燥法,,或者階梯升溫干燥法,,具體的工藝需要根據(jù)溶液的實際情況進(jìn)行摸索。我公司供應(yīng)凍干機可以摸索凍干工藝,,助力篩選凍干配方,,夠買凍干機提供技術(shù)解決方案和技術(shù)協(xié)助,助力項目開發(fā),。
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