隨著醫(yī)療事業(yè)的快速發(fā)展,，PCR試劑，熒光PCR試劑等的凍干迅速崛起,。很多企業(yè)在開發(fā)PCR試劑的凍干,。PCR試劑的凍干就是配制的液態(tài)PCR檢測體系添加凍干保護劑（包括賦形劑）后，先預先凍結(jié)為固體,，在真空條件下,，利用物質(zhì)的升華，使物料低溫脫水而達到試劑干燥的目的,。在冷凍干燥過程中熱敏性物質(zhì)（如酶,、dntp等）不會發(fā)生變性或失活，能保持原來的活性,；凍干前后試劑體積變化很小,，保持了原來的結(jié)構(gòu)；干燥過程在真空下進行,，氧氣極少,，易氧化的物質(zhì)能夠得到保護；冷凍干燥能排除95％～99％以上的水分,，使干燥后產(chǎn)品能長期保存而不致變質(zhì),。冷凍干燥整個干燥過程在低溫中進行，PCR試劑活性不會受到影響,。因此與常規(guī)液態(tài)PCR試劑相比凍干試劑有著常溫穩(wěn)定,、擺脫冷鏈、即時活化,、不相容試劑共存,、無交叉污染等很多明顯優(yōu)勢。
所有的凍干包括藥物的凍干和試劑的凍干,，原理都是一樣的,，都是在含有保護劑的情況下，將我們要保護的試劑或者物質(zhì)進行凍干,。其中凍干保護劑起了很大的作用,，如果沒有凍干保護劑的添加，很多物質(zhì)是不能完好的凍干的,。凍干保護劑使得本來不適合凍干的物質(zhì)能夠獲得良好的凍干狀態(tài),。常見的凍干保護劑包括：糖類、醇類,、氨基酸類,、聚合物類、表面活性劑類、鹽類,、大分子活性物質(zhì)類等，這么多的種類應(yīng)該如何選擇呢,？對于凍干保護劑的選擇不一定,，凍干的曲線不一樣，凍干的本體物質(zhì)的濃度不一樣,，反應(yīng)體系不一樣,，所以終凍干的結(jié)果，凍干的時間成本等是不同的,。而對于凍干保護劑有些通用的常用的物質(zhì)如海藻糖,、蔗糖、甘露醇,、PEG,、pvp等。但是除了這些常用的還有很多如甘油,、乳糖,、半乳糖、組氨酸,、精氨酸,、甘氨酸、右旋糖苷,、吐溫80,、吐溫100、環(huán)糊精,、明膠,、維生素C、維生素B,、牛血清,、二硫蘇糖醇、吐溫20,、明膠等,，這些都是很好的凍干保護劑或者賦形劑。因此對于同一個試劑的凍干可以選擇的凍干保護劑是很多的,。
凍干保護劑的篩選看似簡單,，但是需要大量的工作量，如果想獲得一個高效穩(wěn)定的PCR凍干體系,，需要進行大量的實驗,，保護劑的篩選實驗，凍干曲線的優(yōu)化實驗等。先選擇種類濃度,，再進行優(yōu)化組合,。同樣組分的保護劑用在不同的PCR反應(yīng)體系可能凍干的曲線，凍干的質(zhì)量都會有差別,，這是由于本體物質(zhì)不一樣,，實驗的條件也不*一樣，因此對于凍干沒有一個通用的保護劑,，需要針對自身的反應(yīng)體系進行開發(fā),。
叔丁醇是一種特殊的凍干保護劑加速劑，可以起到凍干保護劑,、賦形劑和加速劑的作用,。如《一種凍干添加劑及熒光PCR反應(yīng)混合物干粉 和制備方法》所述加入叔丁醇做保護劑的熒光pcr反應(yīng)體系的效率能大大提高，而且預凍溫度,，升華溫度,，解析溫度都能大大提高，如作者所述叔丁醇在PCR試劑分裝好準備凍干之前按體積比加入,， 混合后可提高混合物共晶點15-20度,，在凍干顯微鏡下，叔丁醇升華后形成的微通道有利于 水分的析出,，也加快了升華解析的速度,。通過對保護劑的篩選優(yōu)化，熒光PCR反應(yīng)混合物含有凍干添加劑,，不僅擴增性能好,，又節(jié)省凍干時 間，顯著的優(yōu)點在于： 1,、提高了共晶點,，預凍溫度從常見的-40℃～-30℃提高到-15℃； 2,、凍干時間僅需3小時,；3、凍干的成品在試劑管中形態(tài)完整,，晃動不易碎,； 4、凍干組分復溶良好,，并且有良好的穩(wěn)定性,。從以上可以看出經(jīng)過優(yōu)化的凍干保護劑和凍干曲線效率大大提高，而對于常規(guī)的保護劑未優(yōu)化的保護劑和凍干曲線,，一般的PCR反應(yīng)體系的凍干時間在24小時,，而經(jīng)過優(yōu)化篩選后效率可以大大提高,，而對于有的可能酶的凍存過程中添加了一定的保護劑，保護劑濃度合適可能不需要再添加保護劑也可以很容易的凍干,。凍干保護劑屬于凍干配方輔料的篩選,，對于很多物質(zhì)的凍干是*的。制藥和試劑凍干基本上都需要添加一種或者多種保護劑,。
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