蛋白濃度測(cè)定的方法：
1. 紫外分光光度法
紫外光譜吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量是講蛋白質(zhì)溶液直接在紫外分光光度計(jì)中測(cè)定的方法，不需要任何試劑,，操作簡(jiǎn)單且易回收,。蛋白質(zhì)溶液在280nm附近有強(qiáng)烈的吸收，這是由于蛋白質(zhì)中酪氨酸,、色氨酸殘基而引起的,，所以光密度受這兩種氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取過程中雜有的核酸對(duì)測(cè)定結(jié)果引起極大誤差,，其最大吸收在260nm,。所以同時(shí)測(cè)定280及260nm兩種波長(zhǎng)的吸光度，通過計(jì)算可得較為正確的蛋白質(zhì)含量,。
2. 雙縮脲法
利用半飽和硫酸銨或27.8%硫酸鈉——亞硫酸鈉可使血清球蛋白沉淀下來,，而此時(shí)血清白蛋白仍處于溶解狀態(tài)，因此可把兩者分開,，這種利用不同濃度的中性鹽分離蛋白的方法稱為鹽方法,。鹽析分離蛋白質(zhì)的方法不僅用于臨床醫(yī)學(xué)，而且還廣泛地用于生物化學(xué)研究工作中,，如一些特殊蛋白質(zhì)—酶,、蛋白激素等的分離和純化。
蛋白質(zhì)和雙縮脲一樣,，在堿性溶液中能與銅離子形成紫色絡(luò)合物(雙縮脲反應(yīng)),，且其呈色深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，因此可于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定,。
但必須注意,，此反應(yīng)并非蛋白質(zhì)所*，凡分子內(nèi)有兩個(gè)或兩個(gè)以上的肽鍵的化合物以及分子內(nèi)有—CH2—NH2等結(jié)構(gòu)化合物,，雙縮脲反應(yīng)也呈陽性,。本實(shí)驗(yàn)用27.8%硫酸鈉—亞硫酸鈉溶液稀釋血清，取出一部分用雙縮脲反應(yīng)測(cè)定蛋白質(zhì)的含量,，剩余部分則用濾紙過濾,，使析出的球蛋白與白蛋白分離，取出濾液用同一反應(yīng)測(cè)定白蛋白的含量,?？偟鞍着c白蛋白含量之差即球蛋白的含量,。白蛋白與球蛋白之比即所謂的白/球比值,。
3. Folin-酚試劑法
目前實(shí)驗(yàn)室較多用Folin-酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量,，此法的特點(diǎn)是靈敏度高，較雙縮脲高兩個(gè)數(shù)量級(jí),，較紫外法略高,，操作稍微麻煩，反應(yīng)約在15分鐘有最大顯色,，并最少可穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí),，其不足之處是干擾因素較多，有較多種類的物質(zhì)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性,。其原理是蛋白質(zhì)中含有酚基的酪氨酸,，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生蘭色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比,。
4. 考馬氏亮藍(lán)G-250
此方法是1976年Bradform建立,。染料結(jié)合法測(cè)定蛋白質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度較高，可檢測(cè)到微量蛋白,，操作簡(jiǎn)便,、快迅，試劑配制極簡(jiǎn)單,，重復(fù)性好,，但干擾因素多?？捡R氏亮藍(lán)G-250具有紅色和青色兩種色調(diào),、在酸性溶液中游離狀度下為棕紅色，當(dāng)它通過疏水作用與蛋白質(zhì)結(jié)合后,，變成藍(lán)色,，最大吸收波長(zhǎng)從465nm轉(zhuǎn)移到595nm處，在一定的范圍內(nèi),，蛋白質(zhì)含量與 595nm的吸光度成正比,，測(cè)定595nm處光密度值的增加即可進(jìn)行蛋白質(zhì)的定量。
以上便是實(shí)驗(yàn)室中常見的幾種蛋白濃度測(cè)定的方法,，另外還有凱氏定氮法和BCA法,，有凱氏定氮法結(jié)果精確，但操作復(fù)雜,，BCA法又以其試劑穩(wěn)定,，抗干擾能力較強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定,，靈敏度高而受到歡迎,。
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