所需材料
1.KPO4-NaCl緩沖液；25℃時(shí)含0.01 M氯化鈉的0.1 M pH 6.9,。將8.71克K2HPO4溶解在500毫升H2O中,。用0.1 M磷酸二氫鉀（6.8克/500毫升H2O）滴定至pH 6.9。添加氯化鈉至0.01 M .小心,！在下面的步驟2和3中使用通風(fēng)罩和攪拌器/加熱板,。
2.底物溶液,；1%可溶性淀粉。通過(guò)加熱攪拌將1克溶解在80毫升H2O中至約,。90°C,，冷卻并將體積調(diào)節(jié)至100 ml。
3.顯色試劑,；44.0毫米3,，5-二硝基水楊酸。通過(guò)加熱并攪拌ca，將1克3,，5 DNSA溶解在80毫升0.5 M NaOH中。加入30克酒石酸氫鈉,，攪拌直至溶解,。冷卻至室溫，用H2O定容至100 ml,。儲(chǔ)存在琥珀瓶中,。室溫下穩(wěn)定30天。
4.麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)品；0.01 M .將36 mg麥芽糖一水合物溶解在10 ml KPO4-NaCl緩沖液中,。
5.酶溶液,。用KPO4-NaCl緩沖液將淀粉酶稀釋至0.05毫克/毫升,。
6.在適合于100°c加熱的試管中制備以下稀釋液,。
| 管 | 磷酸亞鐵鋰氯化鈉 |  淀粉酶 | 毫升 | 微米 | 毫升H20 |
| 1次測(cè)試 | 0.50 | 0.01毫升 | ----- | ----- | 0.40 |
| 2標(biāo)準(zhǔn) | 0.5 | ---------- | 0.05 | 0.5 | 0.45 |
將所有試管置于25°c下,。在0點(diǎn)時(shí)，向試管1和6中添加0.5 ml底物溶液,，并孵育2分鐘,。通過(guò)添加1.0毫升顯色試劑來(lái)停止反應(yīng)。在溫度塊中以100°加熱所有試管10分鐘,。冷卻至室溫,，向每個(gè)試管中加入2.5毫升H2O。讓試管在室溫下靜置10分鐘,。
7.在540 nm處讀取Abs與空白的對(duì)比,。繪制Abs與麥芽糖μ摩爾的關(guān)系圖,。確定540/μM麥芽糖的斜率。
8.計(jì)算比活度,，即每毫克淀粉酶在pH 6.9時(shí)每分鐘釋放的麥芽糖微米25°C
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