Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF（Strep II標(biāo)簽蛋白純化柱）
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF

（Strep-Tactin Berpharose FF）

1. 產(chǎn)品介紹

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì),，主要用于純化Strep II標(biāo)簽蛋白。Strep II標(biāo)簽為8個氨基酸的小標(biāo)簽（WSHPQFEK）,，由于標(biāo)簽小,，僅為1kDa左右,，一般不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，常用于融合表達(dá)蛋白質(zhì)的檢測和純化,。

本產(chǎn)品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素（Streptavidin）的突變體,，與鏈霉親和素相比，Strep-Tactin對Strep II標(biāo)簽的親和能力至少強(qiáng)10倍以上,，能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結(jié)合和解離,。由于Strep-Tacin對Strep II標(biāo)簽具有高度特異性，一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質(zhì)樣品,。

Strep II標(biāo)簽蛋白與凝膠結(jié)合后可使用脫硫生物素競爭方式進(jìn)行洗脫,，該洗脫方式比較溫和，一般不會影響蛋白質(zhì)的性質(zhì),。如蛋白質(zhì)能耐受一定的堿,，也可用堿液洗脫，比如10mM NaOH等,。Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿清洗,，可以用0.5M NaOH進(jìn)行再生清洗和去除熱源等。另外,，2-（4-羥基苯唑）苯甲酸（HABA）也可用于凝膠再生,，過量的HABA能夠競爭下脫硫生物素,，并且在無HABA的緩沖液中,，能將凝膠上的HABA洗脫,。

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）,、5ml（預(yù)裝柱）,、10ml（預(yù)裝柱）、20ml,、100ml,、500ml 純化流程

①推薦緩沖液

純化Strep II標(biāo)簽蛋白

結(jié)合緩沖液：100mM Tris-HCl,，150mM NaCl，1mM EDTA,，pH8.0；

或20mM NaH2PO4,，280mM NaCl,，6mM KCl,，pH7.4

洗脫緩沖液：結(jié)合緩沖液+ 2.5mM脫硫生物素,；

或10mM NaOH

再生緩沖液：0.5M NaOH；

或結(jié)合緩沖液+1mM HABA

②樣品準(zhǔn)備

上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致,。通?？捎猛肝?、超濾,、稀釋等方法處

理樣品,。并且上柱前應(yīng)過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物,。

③樣品純化

（1）平衡：取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中,，用蒸餾

水清洗5個柱體積去除保存液，再用結(jié)合緩沖液平衡5個柱體積,，建議流速為100cm/h。

（2）上樣：將準(zhǔn)備好的樣品上柱,，建議流速為20-100cm/h，可根據(jù)實際結(jié)合情

況選擇流速，能獲得較好的效果,。

（3）再平衡：上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個柱體積以上，或平衡至基線,，洗去

雜質(zhì),，推薦流速為100cm/h,。

（4）洗脫：用洗脫緩沖液洗10-20個柱體積，建議流速為100cm/h，收集的洗脫

液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍,，并根據(jù)需要置換緩沖液,。

（5）NaOH再生：洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3-5個柱體積，并用0.5M

NaOH再生3-5個柱體積,，再用蒸餾水清洗至中性,，用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下

一次純化,。

（6）HABA再生：用脫硫生物素洗脫目的蛋白的,，還可以用HABA緩沖液再生,，

一般用HABA的結(jié)合緩沖液洗15個柱體積，再用結(jié)合緩沖液洗30個柱體積，然后可

以用20%乙醇保存柱子,，或進(jìn)行下一步純化,。HABA上柱后凝膠顏色會變?yōu)榧t橙色，

在結(jié)合緩沖液平衡后會恢復(fù)正常的白色,，這種再生方式一般使用體積會大些,。



5.注意事項：

1）使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,，影響純化效果,。

2）本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇，4~8℃,。

3） 2-25℃,常壓,避光運輸
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF（Strep II標(biāo)簽蛋白純化柱）