產(chǎn)品名稱:Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF(Strep II標(biāo)簽蛋白純化柱)
產(chǎn)品貨號:YXB2838
產(chǎn)品規(guī)格:1ml
儲存條件:詳見標(biāo)簽
本產(chǎn)品僅供科研實驗用,不做其他用途,。
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF(Strep II標(biāo)簽蛋白純化柱)
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF
(Strep-Tactin Berpharose FF)
1. 產(chǎn)品介紹
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì),,主要用于純化Strep II標(biāo)簽蛋白。Strep II標(biāo)簽為8個氨基酸的小標(biāo)簽(WSHPQFEK),,由于標(biāo)簽小,,僅為1kDa左右,,一般不影響融合后蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能,常用于融合表達(dá)蛋白質(zhì)的檢測和純化,。
本產(chǎn)品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素(Streptavidin)的突變體,,與鏈霉親和素相比,Strep-Tactin對Strep II標(biāo)簽的親和能力至少強(qiáng)10倍以上,,能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結(jié)合和解離,。由于Strep-Tacin對Strep II標(biāo)簽具有高度特異性,一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質(zhì)樣品,。
Strep II標(biāo)簽蛋白與凝膠結(jié)合后可使用脫硫生物素競爭方式進(jìn)行洗脫,,該洗脫方式比較溫和,一般不會影響蛋白質(zhì)的性質(zhì),。如蛋白質(zhì)能耐受一定的堿,,也可用堿液洗脫,比如10mM NaOH等,。Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿清洗,,可以用0.5M NaOH進(jìn)行再生清洗和去除熱源等。另外,,2-(4-羥基苯唑)苯甲酸(HABA)也可用于凝膠再生,,過量的HABA能夠競爭下脫硫生物素,,并且在無HABA的緩沖液中,,能將凝膠上的HABA洗脫,。
2.規(guī)格
1ml(預(yù)裝柱),、5ml(預(yù)裝柱),、10ml(預(yù)裝柱)、20ml,、100ml,、500ml 純化流程
①推薦緩沖液
純化Strep II標(biāo)簽蛋白
結(jié)合緩沖液:100mM Tris-HCl,,150mM NaCl,1mM EDTA,,pH8.0;
或20mM NaH2PO4,,280mM NaCl,,6mM KCl,,pH7.4
洗脫緩沖液:結(jié)合緩沖液+ 2.5mM脫硫生物素,;
或10mM NaOH
再生緩沖液:0.5M NaOH;
或結(jié)合緩沖液+1mM HABA
②樣品準(zhǔn)備
上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致,。通??捎猛肝?、超濾,、稀釋等方法處
理樣品,。并且上柱前應(yīng)過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物,。
③樣品純化
(1)平衡:取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中,,用蒸餾
水清洗5個柱體積去除保存液,再用結(jié)合緩沖液平衡5個柱體積,,建議流速為100cm/h。
(2)上樣:將準(zhǔn)備好的樣品上柱,,建議流速為20-100cm/h,可根據(jù)實際結(jié)合情
況選擇流速,能獲得較好的效果,。
(3)再平衡:上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個柱體積以上,或平衡至基線,,洗去
雜質(zhì),,推薦流速為100cm/h,。
(4)洗脫:用洗脫緩沖液洗10-20個柱體積,建議流速為100cm/h,收集的洗脫
液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍,,并根據(jù)需要置換緩沖液,。
(5)NaOH再生:洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3-5個柱體積,并用0.5M
NaOH再生3-5個柱體積,,再用蒸餾水清洗至中性,,用20%乙醇保存柱子,或進(jìn)行下
一次純化,。
(6)HABA再生:用脫硫生物素洗脫目的蛋白的,,還可以用HABA緩沖液再生,,
一般用HABA的結(jié)合緩沖液洗15個柱體積,再用結(jié)合緩沖液洗30個柱體積,然后可
以用20%乙醇保存柱子,,或進(jìn)行下一步純化,。HABA上柱后凝膠顏色會變?yōu)榧t橙色,
在結(jié)合緩沖液平衡后會恢復(fù)正常的白色,,這種再生方式一般使用體積會大些,。
5.注意事項:
1)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,,影響純化效果,。
2)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇,4~8℃,。
3) 2-25℃,常壓,避光運輸
Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF(Strep II標(biāo)簽蛋白純化柱)