NHS活化瓊脂糖凝膠FF NHS Berpharose FF 親和層析柱介質(zhì)填料
NHS-瓊脂糖凝膠FF

（NHS activated-Berpharose FF）

1. 產(chǎn)品介紹

NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離

介質(zhì),。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，同生物活性大分子有很好的相容性,，具有載量高,、非特異性吸附少和流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團反應(yīng),，特別適合偶聯(lián)抗體,、鏈霉親和素、酶和核酸等功能性生物大分子,。

2.規(guī)格

1ml,、10ml、100ml,、500ml 使用方法

應(yīng)用舉例：

NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯(lián)抗體

①配制抗體：取100 mg IgG用10 ml偶聯(lián)緩沖液（0.2 M NaHCO3,，0.5 M NaCl，pH8.3）溶解,。

②偶聯(lián)反應(yīng)：取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF,，用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液，之后立即加入到抗體偶聯(lián)溶液中,，4℃振蕩偶聯(lián)6 h或者偶聯(lián)過夜,。

③封閉：上述溶液過濾，用50 ml偶聯(lián)緩沖液清洗偶聯(lián)后的凝膠,，用10 ml封閉緩沖液（0.2 M NaHCO3,，0.5 M NaCl，0.5 M乙醇胺，pH8.3）于室溫振蕩4 h（或者過夜）以封閉未偶聯(lián)的基團,，之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可。

④檢測：用SDS-PAGE檢測偶聯(lián)前后的反應(yīng)液并計算偶聯(lián)效率,，偶聯(lián)好的填料根基特性測定功能和載量,。



5.注意事項：

1）偶聯(lián)緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液,，但絕對不能使用氨基緩沖體系（如Tris-HCl緩沖液）,。

2）穩(wěn)定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3，可適當提高偶聯(lián)溫度（如室溫）將偶聯(lián)時間縮短至1~2 h,。

3）如對配基的穩(wěn)定性不夠了解,，可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度，用0.5~1 ml配基相應(yīng)濃度的溶液,，在無填料的條件下模擬偶聯(lián)反應(yīng),，觀察溶液是否會產(chǎn)生沉淀。有沉淀產(chǎn)生說明偶聯(lián)效果不佳,，可適當降低緩沖液pH值或溫度,。同時可以添加約5%的甘油或PEG保護蛋白，避免產(chǎn)生沉淀,。

4）根據(jù)偶聯(lián)蛋白的穩(wěn)定性選擇合適的偶聯(lián)pH值和溫度,。偶聯(lián)較適pH值為pH7.5~9.0，室溫或4℃均可,。提高偶聯(lián)溫度能夠提高配基的偶聯(lián)效率,。

5）偶聯(lián)蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯(lián)凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳,。

6）如果偶聯(lián)的配基不穩(wěn)定,，可于4℃振蕩偶聯(lián)1~12 h以維持配基的活性。偶聯(lián)配基后應(yīng)盡快清洗填料,，避免配基在高pH條件下失活,。

7）封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑，如乙醇胺,、Tris等,。于pH8~9、室溫條件下封閉數(shù)小時可完全封閉,。推薦封閉緩沖液：0.5 M乙醇胺,，0.5 M NaCl，pH8.3或0.1 M Tris-HCl,，pH8.5,。

8）偶聯(lián)中盡量使用溫和的混勻方式，如振蕩,、翻轉(zhuǎn)和旋轉(zhuǎn)等,，如使用磁力攪拌器或者機械攪拌,，需要降低攪拌速度，使填料能夠混勻完全懸浮即可,，避免劇烈攪拌導(dǎo)致凝膠微球破碎,。

9）NHS-瓊脂糖凝膠FF需現(xiàn)取現(xiàn)用，避免取出后放置時間過長導(dǎo)致活性降低,。

10）僅供科研實驗使用


NHS活化瓊脂糖凝膠FF NHS Berpharose FF 親和層析柱介質(zhì)填料