產(chǎn)品名稱:NHS活化瓊脂糖凝膠FF NHS Berpharose FF 親和層析柱介質(zhì)填料
產(chǎn)品貨號:YXB2828
產(chǎn)品規(guī)格:10ml
儲存條件:詳見標簽
本產(chǎn)品僅供科研實驗用,不做其他用途,。
NHS活化瓊脂糖凝膠FF NHS Berpharose FF 親和層析柱介質(zhì)填料
NHS-瓊脂糖凝膠FF
(NHS activated-Berpharose FF)
1. 產(chǎn)品介紹
NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離
介質(zhì),。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),同生物活性大分子有很好的相容性,,具有載量高,、非特異性吸附少和流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團反應(yīng),,特別適合偶聯(lián)抗體,、鏈霉親和素、酶和核酸等功能性生物大分子,。
2.規(guī)格
1ml,、10ml、100ml,、500ml 使用方法
應(yīng)用舉例:
NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯(lián)抗體
①配制抗體:取100 mg IgG用10 ml偶聯(lián)緩沖液(0.2 M NaHCO3,,0.5 M NaCl,pH8.3)溶解,。
②偶聯(lián)反應(yīng):取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF,,用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,之后立即加入到抗體偶聯(lián)溶液中,,4℃振蕩偶聯(lián)6 h或者偶聯(lián)過夜,。
③封閉:上述溶液過濾,用50 ml偶聯(lián)緩沖液清洗偶聯(lián)后的凝膠,,用10 ml封閉緩沖液(0.2 M NaHCO3,,0.5 M NaCl,0.5 M乙醇胺,pH8.3)于室溫振蕩4 h(或者過夜)以封閉未偶聯(lián)的基團,,之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可。
④檢測:用SDS-PAGE檢測偶聯(lián)前后的反應(yīng)液并計算偶聯(lián)效率,,偶聯(lián)好的填料根基特性測定功能和載量,。
5.注意事項:
1)偶聯(lián)緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液,,但絕對不能使用氨基緩沖體系(如Tris-HCl緩沖液),。
2)穩(wěn)定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3,可適當提高偶聯(lián)溫度(如室溫)將偶聯(lián)時間縮短至1~2 h,。
3)如對配基的穩(wěn)定性不夠了解,,可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度,用0.5~1 ml配基相應(yīng)濃度的溶液,,在無填料的條件下模擬偶聯(lián)反應(yīng),,觀察溶液是否會產(chǎn)生沉淀。有沉淀產(chǎn)生說明偶聯(lián)效果不佳,,可適當降低緩沖液pH值或溫度,。同時可以添加約5%的甘油或PEG保護蛋白,避免產(chǎn)生沉淀,。
4)根據(jù)偶聯(lián)蛋白的穩(wěn)定性選擇合適的偶聯(lián)pH值和溫度,。偶聯(lián)較適pH值為pH7.5~9.0,室溫或4℃均可,。提高偶聯(lián)溫度能夠提高配基的偶聯(lián)效率,。
5)偶聯(lián)蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯(lián)凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳,。
6)如果偶聯(lián)的配基不穩(wěn)定,,可于4℃振蕩偶聯(lián)1~12 h以維持配基的活性。偶聯(lián)配基后應(yīng)盡快清洗填料,,避免配基在高pH條件下失活,。
7)封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑,如乙醇胺,、Tris等,。于pH8~9、室溫條件下封閉數(shù)小時可完全封閉,。推薦封閉緩沖液:0.5 M乙醇胺,,0.5 M NaCl,pH8.3或0.1 M Tris-HCl,,pH8.5,。
8)偶聯(lián)中盡量使用溫和的混勻方式,如振蕩,、翻轉(zhuǎn)和旋轉(zhuǎn)等,,如使用磁力攪拌器或者機械攪拌,,需要降低攪拌速度,使填料能夠混勻完全懸浮即可,,避免劇烈攪拌導(dǎo)致凝膠微球破碎,。
9)NHS-瓊脂糖凝膠FF需現(xiàn)取現(xiàn)用,避免取出后放置時間過長導(dǎo)致活性降低,。
10)僅供科研實驗使用
NHS活化瓊脂糖凝膠FF NHS Berpharose FF 親和層析柱介質(zhì)填料