1. 選擇合適的ELISA格式

由于ELISA的設(shè)計非常靈活,，因此可以根據(jù)實(shí)驗需求進(jìn)行合適的格式選擇,。最好使用簡單的ELISA格式,，這樣對成本控制更有利；但是同樣的,，還需要考慮特異性,、干擾等問題。例如,，如果是篩選合適的單抗,，那么簡單的直接或間接ELISA比較合適；如果是在復(fù)雜基質(zhì)中特異性檢測目標(biāo)待測物時,，則夾心ELISA是好的選擇,。如果是檢測一些分子量較小,，同時關(guān)鍵試劑不好獲得時，競爭ELISA則是更好的選擇,。

關(guān)于結(jié)合特性，可能是在包被一些特殊蛋白時需考量,。如：因通常ELISA包被是利用疏水作用等物理特性包被的,，當(dāng)需要包被的蛋白太小且大部分氨基酸都是親水氨基酸時，常規(guī)的包被方式就不合適,，這時候其實(shí)也可以更管合適的ELISA板,，如處理后的親水表面ELISA板。

選擇合適的包被方式包被主要要考慮的是包被液,、溫度,、濃度、時間等條件,。常見的包被液有碳酸鹽緩沖液（CBS）和磷酸鹽緩沖液（PBS）,。CBS pH值在9.6左右，呈弱堿性,；PBS pH值在7.4左右，偏中性,。包被的蛋白可能會因為一些氨基酸,、等電點(diǎn)的原因，導(dǎo)致在堿性條件下包被不理想,，可以嘗試不同類型的包被液,。

包被溫度一般有4℃,、室溫、37℃等條件,。一般包被溫度和包被時間相配合,。一般包被4℃和室溫都是過夜包被，而37℃通常2小時左右就可以了,。但是一般4℃和室溫過夜包被更加穩(wěn)定充分,，且對蛋白保護(hù)較好，37℃可能一些蛋白不太穩(wěn)定,，包被均一性可能也有些不確定,，在條件允許下，推薦過夜包被,。包被濃度的選擇一般和板載量和測量格式的適配程度相關(guān),，一般通過棋盤進(jìn)行確認(rèn)和選擇，將會在棋盤條目進(jìn)行闡述,。值得注意的是,，一些小蛋白如多肽很難包被，這是可選擇對其進(jìn)行蛋白偶聯(lián),，常見的偶聯(lián)物有BSA,、KLH、OVA等,。

4. 選擇合適的封閉液

封閉液的選擇關(guān)乎到ELISA的整體性能,，封閉的目的是包被完成后，將空白位置填補(bǔ)上,，防止后續(xù)步驟中的任何非目標(biāo)結(jié)合的蛋白結(jié)合到板子上,，造成干擾和背景信號異常。通常的封閉液都是一些無關(guān)蛋白,，如BSA,、動物血清、脫脂奶粉,、酪蛋白等,。目前也有一些針對特殊需求的非蛋白封閉劑。當(dāng)你在進(jìn)行ELISA檢測無論如何進(jìn)行試劑濃度調(diào)整,，發(fā)現(xiàn)背景信號都很異常時,，可能就是封閉液選擇不對，就需要分析可能的原因,。如封閉液BSA較大,，在一些特殊條件下可能不能填補(bǔ)非特異結(jié)合的無關(guān)蛋白的結(jié)合位置，這時候就需要更換成酪蛋白等較小的封閉試劑等,。