一,、背景過高

原因：

封閉不充分；一抗過濃,；孵育溫度過高,；一抗二抗封閉劑間有交叉反應(yīng)；洗膜不充分,；膜過于干燥

方案：

延長(zhǎng)封閉時(shí)間或更換封劑,；稀釋一抗；4℃孵育,；加入Tween-20,，以減少交叉反應(yīng)；設(shè)二抗對(duì)照,，稀釋二抗,；增加洗膜次數(shù)；避免干膜

二,、無條帶或太弱

原因：

一抗二抗選擇錯(cuò)誤,；一抗二抗?jié)舛冗^低；一抗失效,；蛋白含量過低,；轉(zhuǎn)膜不充分或洗膜過度；過度封閉,；二抗受疊氛鈉抑制,；底物與酶失效；曝光時(shí)間過短

方案：

選擇正確抗體,；檢查抗體和顯色試劑盒保質(zhì)期,；提高樣品蛋白含量；設(shè)內(nèi)參對(duì)照,，轉(zhuǎn)膜對(duì)照,；轉(zhuǎn)膜效果的檢查；減少洗膜時(shí)間

降低封閉液濃度,，減少封閉時(shí)間,；延長(zhǎng)曝光時(shí)間

三、雜帶過多

原因：

蛋白樣本具有多種修飾,；蛋白樣本降解,；蛋白存在二聚體或多聚體；一抗二抗?jié)舛冗^高,；多克隆抗體

方案：

使用去修飾的試劑,；使用蛋白酶抑制劑,；電泳上樣前，煮沸10 min,，以增強(qiáng)蛋白質(zhì)解聚變性,；降低抗體濃度；選用單克隆抗體

四,、其他問題

1.背景白色條帶 → 轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡或抗體分布不均

2.暗片現(xiàn)白條帶 → 一抗或二抗加入過多

3.目的條帶過低/過高 → 膠濃度不合適

4.“微笑"條帶 → 遷移過快,、電泳溫度過高