玻璃酸酶測(cè)定法

試劑

（1） 醋酸-醋酸鉀緩沖液 取醋酸鉀 14g,，冰醋酸 20.5ml,，再加水稀釋至 1000ml,。

（2） 磷酸鹽緩沖液 取磷酸二氫鈉 2.5g,、無(wú)水磷酸氫二鈉 1.0g 與氯化鈉 8.2g，加水溶解至 1000mL,。

（3） 水解明膠 取明膠 50g,，加水 1000ml，在 121℃加熱 90 分鐘,，然后冷凍干燥,。

（4） 水解明膠稀釋液 取磷酸鹽緩沖液與水各 250ml，加水解明膠 330mg,，搖勻，在 0～4℃保存,。如溶液不發(fā)生渾濁，可繼續(xù)使用,。

（5） 血清貯備液 取新鮮牛血清或凍干牛血清（先用水溶解并稀釋至標(biāo)示量體積）1份，加醋酸-醋酸鉀緩沖液 9 份稀釋?zhuān)僖?nbsp;4mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié) pH 值至 3.1，放置 18～24小時(shí)后再用,。在 0～4℃保存，可應(yīng)用 30 日,。

（6） 血清溶液  血清貯備液中血清總固體（取牛血清適量，置裝有潔凈砂粒并在 105℃干燥至恒重的坩堝中,，置水浴上蒸干后,，再在 105℃干燥至恒重）在 8%左右者,，取 1 份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液 3 份稀釋?zhuān)谎蹇偣腆w在 5%左右者,，取 1 份,，用醋酸-醋酸鉀緩沖液 2份稀釋,。臨用時(shí)制備。

（7） 玻璃酸鉀貯備液 取預(yù)先經(jīng)五氧化二磷減壓干燥 48 小時(shí)的玻璃酸鉀，加水制成每 1ml 中含 0.5mg 的溶液。在 0℃以下保存,，可應(yīng)用 30 日。

（8） 玻璃酸鉀溶液 取玻璃酸鉀貯備液 1 份,，用磷酸鹽緩沖液 1 份稀釋。臨用時(shí)制備。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱(chēng)取玻璃酸酶標(biāo)準(zhǔn)品適量,，加冷的水解明膠稀釋液制成每1ml 中含 1.5 單位的溶液,。臨用時(shí)制備。

供試品溶液的制備 按供試品的標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)精密稱(chēng)取供試品適量,，加冷的水解明膠稀釋液制成每 1ml 中含約 1.5 單位的溶液。臨用時(shí)制備,。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取大小相同的試管 12 支,，按順序加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0.00ml、0.10ml,、 0.20ml,、0.30ml、0.40ml 與 0.50ml,，各 2 支,；再依次相應(yīng)加入水解明膠稀釋液 0.50ml,、0.40ml,、0.30ml,、0.20ml,、0.10ml 與 0.00ml,，每隔 30 秒順序加入玻璃酸鉀溶液 0.50ml,，使每一管的總體積為 1.00ml，搖勻,，置 37℃±0.5℃水浴中；每管準(zhǔn)確保溫 30 分鐘后,，每間隔 30 秒鐘

順序取出，立即順序加入血清溶液 4.0ml,，搖勻,，在室溫放置 30 分鐘，搖勻,，在 640nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,；同時(shí)以磷酸鹽緩沖液 0.50ml 代替玻璃酸鉀溶液，加水解明膠稀釋液 0.50ml,，搖勻,，按上述方法自“置 37℃±0.5℃的水浴中"起同法操作，作為空白,。以吸光度為縱坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品溶液的效價(jià)（單位）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

測(cè)定法 取大小相同的試管 6 支,，依次加供試品溶液 0.20ml,、0.30ml 與 0.40ml，各 2支,；再依次相應(yīng)加入水解明膠液 0.30ml,、0.20ml 與 0.10ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下,， 自“每隔 30 秒順序加入玻璃酸鉀溶液 0.50ml"起,，依法測(cè)定，自標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得效價(jià)（單位）后,，分別除以供試品的重量（mg）,，算出 6 份供試品的平均數(shù),，即為玻璃酸酶的效價(jià)（單位）。