GIBCO馬血清熱滅活

英文名：Heat-Inactivated Horse Serum

規(guī)格：500ML

貨號：26050-088

GIBCO馬血清熱滅活 通常作為補(bǔ)充成分添加在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)使用,。它能夠提供各種大分子蛋白，小分子量營養(yǎng),，水溶性成分的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,，和其它一些細(xì)胞在體外所必需的成分，如激素和附著因子,。血清可以結(jié)合或中和一些生長因子中的有毒成分,，并提供培養(yǎng)基的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)時血清的添加依賴于基礎(chǔ)培養(yǎng)基的化學(xué)組成,，培養(yǎng)細(xì)胞的類型,，及所用的培養(yǎng)系統(tǒng)。

我們在提供細(xì)胞培養(yǎng)基,、平衡鹽溶液,、無血清培養(yǎng)基和試劑的同時,，還提供高品質(zhì)的血清,。我們對血清制備進(jìn)行全過程監(jiān)管。從血清收集到zui終產(chǎn)品檢驗(yàn)和內(nèi)部稽核的每一個步驟，我們都采用設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)操作程序,，以確保整個過程中每個環(huán)節(jié)的產(chǎn)品質(zhì)量,。對整個過程的控制可以保證產(chǎn)品的持續(xù)高品質(zhì)，降低不同批次的差異,。

處理：全部血清：收集的血液均在冷藏條件下處理,。血清和血分離后立即將血清合并并冷凍。只有符合我們的檢測標(biāo)準(zhǔn)的血清才被接受作進(jìn)一步處理,。

熱滅活血清：熱滅活是在56℃水浴中嚴(yán)格控溫30分鐘,。透析血清：用10,000截留分子量的透析膜在0.15M的NaCl中進(jìn)行透析，直到葡萄糖水平低于5mg/dl(用鄰甲苯胺測試法檢驗(yàn)),。γ射線照射血清：可按客戶要求對血清進(jìn)行γ射線照射,。通過γ射線照射以滅活各種動物血清(包括胎牛血清、新生牛血清,、豬血清和馬血清)中的病毒和支原體的方法已經(jīng)得到證實(shí),。研究證實(shí)照射劑量在30-45kGy為宜。血清在此照射后物理化學(xué)特性和細(xì)胞培養(yǎng)表現(xiàn)沒有變化,。裝瓶：粗血清須通過一系列的過濾才成為成品,。zui后的過濾步驟包括使用0.2um和0.1um的無菌過濾。胎牛血清須通過三次0.1um過濾,，其他血清須通過0.2um過濾,。zui終產(chǎn)品的質(zhì)量控制：我們采取以下方法對每一批次的產(chǎn)品選取一定數(shù)量的樣品進(jìn)行質(zhì)量控制分析：

化學(xué)檢測：使用低溫凝固點(diǎn)的方法檢測滲透壓，以保證符合產(chǎn)品規(guī)范,。我們每天使用國家標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)研究所標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液對我們的滲透壓檢測儀器進(jìn)行校準(zhǔn),。同樣每天使用國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液對pH計進(jìn)行校準(zhǔn)。

使用電泳圖譜鑒定血清的整體性質(zhì),。樣品被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素基質(zhì)中,，并在緩沖體系內(nèi)遷移。條帶經(jīng)染色,、清潔,、干燥后用密度儀進(jìn)行掃描，以檢測白蛋白和球蛋白組分的相對濃度,。為證實(shí)是否在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行采血和處理,，使用修飾的Fleming方法對血紅蛋白進(jìn)行分光光度檢測。

隨著動物年齡的增加,，血清總蛋白含量也相應(yīng)地提高,。使用自動化的Biuret方法進(jìn)行總血清蛋白的檢測，以確認(rèn)動物年齡并驗(yàn)證符合產(chǎn)品規(guī)范,。使用色度計在不同波長下檢測樣品和Biuret試劑混合波的吸光度,。自動計算結(jié)果后,，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，即可得到蛋白值(克/公升),。

穩(wěn)定性檢測程序：在每一個標(biāo)記為體外診斷的產(chǎn)品上顯示的效期表明了這個產(chǎn)品具有多長時間的效能,。我們的穩(wěn)定性程序確定和證明了產(chǎn)品效期。我們定期監(jiān)測批量產(chǎn)品,，確定產(chǎn)品在推薦貯存條件下具有可接受效果的時間長度,。

微生物學(xué)檢測：所有血清使用Barile&Kern的大體積方法檢測支原體。在推薦方法的檢測范圍內(nèi)檢測結(jié)果是準(zhǔn)確的,。樣品至少應(yīng)該在肉湯中合并培養(yǎng)3個星期,，同時要在瓊脂平板上進(jìn)行不少于4次傳代培養(yǎng)。在有氧和厭氧(95%氮,，5%CO2)條件下,，平板在36±2℃下孵育。在檢測過程中,，每周對瓊脂平板進(jìn)行一次微生物生長情況檢驗(yàn),。使用Dienes染色法對懷疑被污染的瓊脂平板進(jìn)行支原體菌落的檢測。然后,，對平板進(jìn)行再次鏡檢,。對孵育肉湯瓶要定期進(jìn)行濁度和pH值變動的檢測。在推薦方法檢測范圍內(nèi),，所有血清也要使用Hoechst熒光DNA染色法進(jìn)行不可在肉湯中培養(yǎng)的支原體(包括M.hyorhinis屬)檢測,。

病毒檢測：已知無外來物質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)基須經(jīng)過在包含15%測試血清的生長培養(yǎng)基中進(jìn)行為期21天的三次傳代培養(yǎng)。使用對照培養(yǎng)基和已知對外來物質(zhì)為陰性的血清平行地維持陰性對照培養(yǎng),。整個期間,，檢測所有的培養(yǎng)情況，以便發(fā)現(xiàn)是否存在病毒誘發(fā)的細(xì)胞形態(tài)改變或致細(xì)胞病變效應(yīng),。在14至21天的培養(yǎng)期間,，對含有檢測血清的平行培養(yǎng)瓶按下面標(biāo)準(zhǔn)病毒檢測方法進(jìn)行評估。

將其中一瓶檢測細(xì)胞用胰蛋白酶消化,，然后把細(xì)胞分別加入到總面積為6cm 2 的六室載玻片上,。同時準(zhǔn)備陰性對照載玻片。在檢測培養(yǎng)的單室載玻片上加入牛病毒性腹瀉病毒(BVDV),、牛細(xì)小病毒,、牛腺病毒、狂犬病毒和呼腸病毒的染色劑,，作為單個的陽性對照,。再經(jīng)過7天培養(yǎng)(總共21天)，利用熒光抗體技術(shù)檢測病毒,。

通過對檢測培養(yǎng)進(jìn)行蘇木精伊紅染色,，觀察致細(xì)胞突變效應(yīng)(CPE)或其他病毒誘導(dǎo)效應(yīng),。檢測細(xì)胞是否存在CPE效應(yīng)、內(nèi)含物,、多核體或其他異常效應(yīng)。

內(nèi)毒素檢測：我們用阿米巴變形細(xì)胞溶解物(LAL)凝膠法來檢測胎牛血清的內(nèi)毒素含量,。

效能檢測：
對每一批次的胎牛血清,，我們都進(jìn)行下述培養(yǎng)效能檢測。選擇血清zui重要的標(biāo)準(zhǔn)是其支持特殊細(xì)胞的生長能力,。因此,，除了保證血清通過嚴(yán)格的品質(zhì)控制，我們也同時在實(shí)驗(yàn)室條件下對血清的三個重要的培養(yǎng)效能進(jìn)行檢測：克隆效率,、貼壁效果和二倍體成纖維細(xì)胞生長促進(jìn),。