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一,、主要步驟：
①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化,，細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴,。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率，復蘇過程中一般細胞死亡率在20%～25%之間,。
②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒,，然后放置在冰浴上。
③小心開啟瓶蓋,，把細胞轉(zhuǎn)入含有4mL培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,，然后把培養(yǎng)瓶移至培養(yǎng)箱，36℃～38℃培養(yǎng)1h,，讓細胞貼壁,。
④細胞貼壁后,，小心移棄培養(yǎng)基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO),、死細胞及其碎片,，加5mL新鮮培養(yǎng)基，36℃～38℃培養(yǎng),。
⑤細胞培養(yǎng)24h后,，更換新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直到形成單層,，便可以傳代。
⑥詳細記錄復蘇細胞的名稱,、數(shù)量,、復蘇時間、存放部位等,。

二,、注意事項：
1、注意無菌操作,。
2,、應(yīng)在1-2min內(nèi)使凍存液融化。如果復溫速度太慢,，則會造成細胞損傷,。另外，細胞復蘇后的操作最好在4℃冰浴中進行,，以減少冷凍保護劑對細胞的毒性,。
3、細胞復蘇過程中,，升溫的速率要大,，把從液氮或-70℃冰箱中取出的細胞在最短的時間內(nèi)放入水浴鍋。
4,、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動,，使其受熱均勻，并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞,。打開細胞凍存管之前要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px; padding: 0px;"/>5,、液氮操作有一定的危險性，打開液氮罐取出細胞時,，戴上防護眼鏡,。