氮自由基（DPPH）清除能力測(cè)試試劑盒

(A001-96T 分光光度計(jì)法)

一.測(cè)定原理

DPPH自由基是一種較穩(wěn)定的含氮自由基,，有一個(gè)單電子,，在517nm下有強(qiáng)吸收,，如果有其他物質(zhì)提供一個(gè)電子使此單電子配對(duì),，其吸收會(huì)消失褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比,。即反應(yīng)物清除氮自由基的能力與試劑在517nm的吸光值成反比,。

二.試劑組成

試劑一：DPPH試劑1mL×1瓶

試劑二：100μg/mL 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液 20mL×1瓶

三.儲(chǔ)存條件及有效期

試劑盒-20℃可保存6個(gè)月。

四.試劑的配制

試劑一：37℃平衡20min以上,，待試劑融化后,，在試劑瓶中加入100ml 95%乙醇或無(wú)水乙醇，劇烈震蕩使試劑充分溶解,。

注意：溶解一定要充分,，如有條件可采用超聲波助溶。

試劑二應(yīng)用液：根據(jù)是否需要制作陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)有兩種配制方法,。

1. 如僅需要將維生素C作為質(zhì)控品,，可取100μL 試劑二，加入900μL樣品稀釋液,，充分混勻,；

2. 如需測(cè)定維生素C的IC₅₀,，可分別移取0，0.5,，1.0,，1.5，2.0,，2.5,，3.0，4.0,，5.0mL 試劑二于空離心管中,，再依次加入10.0，9.5,，9.0,，8.5，8,，7.5,，7.0，6.0,，5.0ml樣品稀釋液,，充分混勻。配制成0,，5,，10，15,，20,，25，30,，40,，50 μg/mL 維生素C樣品。

五.操作步驟

充分混勻,，室溫避光靜置30min使之充分反應(yīng),。選用0.5mm比色皿³，517nm處測(cè)定吸光值,。

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