牛乳鐵蛋白(LF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　檢測(cè)范圍： 96T25μg/mL–850μg/mL

　　使用目的：本試劑盒用于測(cè)定牛血清,，血漿及相關(guān)樣本中乳鐵蛋白(LF)含量,。

　　實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛乳鐵蛋白(LF)水平。用純化的牛乳鐵蛋白(LF)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入乳鐵蛋白(LF)，再與HRP標(biāo)記的乳鐵蛋白(LF)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的乳鐵蛋白(LF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中乳鐵蛋白(LF)濃度,。

　　試劑盒組成

　　130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液

　　6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑

　　6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　1.5ml×1瓶4樣品稀釋液

　　6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液

　　6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液

　　6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)

　　標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡s快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

　　操作步驟

　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。800μg/mL5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400μg/mL4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200μg/mL3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100μg/mL2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μg/mL1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

　　7.溫育：操作同3,。

　　8.洗滌：操作同5。

　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

　　11.測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

　　操作程序總結(jié)：

　　計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。

　　牛乳鐵蛋白(LF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書 注意事項(xiàng)

　　1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

　　3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

　　4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

　　6.底物請(qǐng)避光保存,。

　　7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

　　9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

　　保存條件及有效期1.試劑盒保存：2-8℃,。2.

　　有效期：6個(gè)月