人葉黃素(Lutein)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測(cè)范圍：

96T

3pg/ml-180pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中葉黃素(Lutein)含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人葉黃素(Lutein)水平。用純化的葉黃素 (Lutein)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入葉黃素(Lutein),， 再與 HRP 標(biāo)記的葉黃素(Lutein)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗 滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終 的黃色,。顏色的深淺和樣品中的葉黃素(Lutein)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測(cè)定 吸光度(OD 值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人葉黃素(Lutein)濃度,。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(320pg/ml) 0.5ml×1 瓶 3 酶標(biāo)包被板

12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋,。

160pg/ml

5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

80pg/ml

4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40pg/ml

3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20pg/ml

2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10pg/ml

1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、 待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此 重復(fù) 5 次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6.底物請(qǐng)避光保存,。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

人葉黃素(Lutein)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

保存條件及有效期

1.試劑盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6 個(gè)月