做ELISA實驗,，事先收集好的標本需如何處理?

　　做ELISA實驗，在處理樣本應該先了解收集樣本的注意事項,。

　　【標本收集注意事項】

　　1.收集血液的試管應為一次性的無熱原,，無內(nèi)毒素試管。

　　2.血清和血漿避免使用溶血,，高血脂標本,。

　　3.標本應清澈透明，懸浮物應離心去除,。

　　4.標本收集后若不及時檢測,，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃,，-80℃電冰箱內(nèi),，避免反復凍融。

　　5.可根據(jù)標本的實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議做預實驗,，以確定稀釋倍數(shù)) 。

　　6.收集標本,，盡量做到雙份的用量,，避免一次實驗失敗，重復實驗時標本缺失,，從而耽誤實驗進程,。

　　7.收集標本時，應該做好防護措施(比如戴手套,，口罩,，護目鏡等)，認為所有標本都具有一定的潛在危險性,。

　　8.樣本處理應該在生物安全柜里面,，并且正確使用生物安全柜。

　　樣本正確的處理方法應該是這樣的：

　　【標本處理辦法】

　　1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,，然后1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存,。

　　2.血漿：用EDTA,，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑,，加入血液混勻后,，1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試,，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存,。

　　3.組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,，在冰水中勻漿,。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試,，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

　　4.細胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試,，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。

　　5.尿液,，腹水,，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存,。

　　注：樣品稀釋的一般原則

　　用戶須查閱相關文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量,，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的檢測范圍,。樣品的稀釋應有詳細記錄,。

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