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ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)需恪守的中心原理
,,的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,,又保留酶的活性。
ELISA檢測試劑盒可以用于:(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速,、靈敏,、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn),。
ELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)中的血清需采用血管收集血液,,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,,收集上清,,分裝后,標(biāo)好號,,-20°C或-80°C保存,。運(yùn)輸是用干冰。
把ELISA檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說,,操作流程主要有以下幾步,。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,,使抗體與CD4+T結(jié)合,。然后洗去不需要的非目標(biāo)(即不表達(dá)CD4的),留下磁珠-抗體-復(fù)合物,。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞,,形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物,。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物,而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中,。最后,,只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進(jìn)行下游研究了。
ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)有必要恪守以下3個中心原理:
(1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,,并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;
(2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物,,而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可依據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在,,并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,,ELISA檢測試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。
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