登革熱IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑盒

澳洲PANBIO登革熱抗原NS1快速檢測(cè)用于定性的快速檢測(cè)人群血清,、血漿或全血中登革病毒的IgM及IgG抗體,。可在15分鐘內(nèi)檢測(cè)結(jié)果,。

· 結(jié)果快速,，15分鐘出結(jié)果。
· 結(jié)果值得信賴,，敏感性和特異性均> 90%
· 方式靈活,，樣本可為全血、血清或血漿
· 能區(qū)分出登革的原發(fā)感染和繼發(fā)感染
· 可進(jìn)行完整的測(cè)試,，保存方便,，常溫2-30℃保存

標(biāo)本采集和制備

靜脈穿刺獲取的血液應(yīng)該置于室溫（20-25℃）下直到凝塊形成，再按照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究院（CLSI）的《認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)——診斷用血液標(biāo)本的靜脈穿刺采集程序,，H3》離心,。應(yīng)該盡快分離血清。如果在2天內(nèi)不進(jìn)行檢測(cè),，血清應(yīng)該2-8℃冷藏或者低于或等于- 20℃冷凍儲(chǔ)存,。不*使用自解凍冷凍機(jī)儲(chǔ)存血清。不*使用黃疸血清,，以及出現(xiàn)溶血,、脂血或微生物生長(zhǎng)的血清。CLSI提供了儲(chǔ)存血液標(biāo)本的建議,，《認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)——血液標(biāo)本的處理加工程序,，H18》。

檢測(cè)程序

注： 確保所有試劑在開(kāi)始測(cè)定前平衡至室溫（20-25℃）,。在所給時(shí)間和溫度范圍以外進(jìn)行測(cè)試可能產(chǎn)生無(wú)效的結(jié)果,。不在預(yù)定時(shí)間和溫度范圍內(nèi)的測(cè)試必須進(jìn)行重復(fù)。

ELISA程序

• 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板并插入測(cè)試條槽,。陰性質(zhì)控品,、陽(yáng)性質(zhì)控品和校準(zhǔn)品各需5個(gè)微孔，一式三份,。確保剩下未使用的微孔密封于鋁箔袋內(nèi),。

• 使用適當(dāng)?shù)脑嚬芑蛭⒌味ò逑♂岅?yáng)性質(zhì)控品（P）、陰性質(zhì)控品（N）,、校準(zhǔn)品（CAL）和患者樣本,。

• 混合10μL血清與1000μL樣本稀釋劑,。混合均勻,。

或者，

• 混合10μL血清與90μL樣本稀釋劑,。取出20μL稀釋血清,，加入180μL樣本稀釋劑?；旌暇鶆?。

• 吸取100 µL樣本稀釋劑、質(zhì)控品和校準(zhǔn)品添加至對(duì)應(yīng)的微孔中,。

• 蓋住測(cè)定板并在37°C ± 1°C孵育30分鐘,。

• 用稀釋后的清洗緩沖液洗6次（參考清洗程序）。

• 吸取100 µL HRP標(biāo)記抗人IgG添加到每個(gè)微孔中,。

• 蓋住測(cè)定板并在37°C ± 1°C孵育30分鐘,。

• 用稀釋后的清洗緩沖液洗6次（參考清洗程序）。

• 吸取100 µL TMB添加到每個(gè)孔中,。

• 在室溫（20-25℃）下孵育10分鐘,，從第①次添加開(kāi)始計(jì)時(shí)。藍(lán)色將會(huì)顯現(xiàn),。

• 按照相同順序吸取100μL終止液添加到每個(gè)孔中,，計(jì)時(shí)同TMB添加步驟?；旌暇鶆?。藍(lán)色將變成黃色。

• 在30分鐘內(nèi)讀取每個(gè)孔在450nm波長(zhǎng)的吸光度,，參考濾波器為600-650nm,。

注： 如果使用雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)，將參考濾波器設(shè)定在600-650nm之間,。在沒(méi)有參考濾波器的情況下讀取450nm的微孔結(jié)果可能由于背景原因?qū)е挛舛绕摺?/span>

清洗程序

為了清除未復(fù)合的樣本或成分,，有效清洗是ELISA程序的關(guān)鍵步驟。

A.自動(dòng)洗板機(jī)

• *抽凈所有微孔,。

• 在清洗循環(huán)期間將每個(gè)孔裝滿至邊緣（350μL）,。

• 完成6次清洗后，將測(cè)定板倒立于吸水紙巾上用力敲打,，確保清除所有清洗緩沖液,。

• 為了確保有效清洗，必須維持自動(dòng)洗板機(jī)良好的保養(yǎng),。必須始終遵守廠商的清潔說(shuō)明,。

B.手動(dòng)清洗

• 將測(cè)定板的內(nèi)含物丟棄到適當(dāng)?shù)膹U物容器,。

• 用適當(dāng)?shù)臄D壓瓶將微孔填滿清洗緩沖液。避免清洗緩沖液起泡,，否則會(huì)降低清洗效率,。立即丟棄微孔里的清洗緩沖液。

• 再將微孔填滿清洗緩沖液,，并立即丟棄,。

• 重復(fù)步驟（3）4次，共用清洗緩沖液清洗六（6）次,。

• 后一次清洗完成后,，丟棄微孔的內(nèi)含物并將測(cè)定板置于吸水紙巾上敲打，以確保清除所有清洗緩沖液,。

質(zhì)量控制

每個(gè)試劑盒包含校準(zhǔn)品,，陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。這些組成的可接受值參見(jiàn)附帶的規(guī)格表,。陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品用于監(jiān)測(cè)重大的試劑失敗,。陽(yáng)性質(zhì)控品不能確保測(cè)定臨界值的精密度。如果質(zhì)控品或校準(zhǔn)品的任一吸光度讀數(shù)不符合規(guī)定,，則測(cè)試無(wú)效且應(yīng)重新測(cè)試,。如果測(cè)試無(wú)效，則不能報(bào)告患者結(jié)果,。必須按照地方,、州和/或聯(lián)邦法規(guī)或認(rèn)證要求以及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)QC程序執(zhí)行質(zhì)控（QC）要求。有關(guān)適當(dāng)?shù)腝C操作規(guī)程指南,，建議用戶參考CLSI C24-A和42 CFR 493.1256,。

預(yù)期值和測(cè)試局限性

• 必須結(jié)合患者的臨床體征和癥狀來(lái)做臨床診斷。該試劑盒的結(jié)果本身并沒(méi)有診斷作用,，應(yīng)該與其他臨床數(shù)據(jù)和患者癥狀聯(lián)用,。

• 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值取決于病毒存在的可能性。只能檢測(cè)有臨床癥狀或疑似接觸過(guò)相關(guān)病毒的患者,。

• 黃病毒屬內(nèi)的血清型交叉反應(yīng)（登革熱1,、2、3,、4,，日本腦炎，西尼羅河病毒,，墨累山谷腦炎等）在IgG,， 水平上十分常見(jiàn)^3,4,5。在東南亞進(jìn)行的試驗(yàn)表明90%的日本腦炎患者（n=20）的IgG間接結(jié)果大于10 Panbio單位,。

• 利用地方人群測(cè)定了臨界值,。 人群血清流行病學(xué)在不同地理區(qū)域應(yīng)該隨時(shí)間而變化,。終，臨界值需要根據(jù)對(duì)當(dāng)?shù)氐难芯窟M(jìn)行調(diào)整,。

• 尚未確定目測(cè)結(jié)果判定的性能特征,。

• ELISA篩選試驗(yàn)結(jié)果表明登革熱感染的所有血清必須送到參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行陽(yáng)性確認(rèn)和流行病學(xué)記錄。

性能特征

用Panbio Dengue IgG Indirect ELISA對(duì)386份經(jīng)過(guò)血凝抑制試驗(yàn)（HAI）和ELISA方法的回顧性血清進(jìn)行檢測(cè),。這些血清包括來(lái)自以下組別的樣本：108份血清陰性樣本,、84份原發(fā)性樣本、94份繼發(fā)性樣本和100份地方性樣本,。 通過(guò)Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 對(duì)這些血清樣本進(jìn)行檢測(cè)并將其結(jié)果與血清的登革熱感染狀態(tài)進(jìn)行對(duì)比，從而確定檢測(cè)的靈敏度,、特異性和一致性,。

馬來(lái)西亞的一所大學(xué)通過(guò)基于世界衛(wèi)生組織（WHO）標(biāo)準(zhǔn)的HAI試驗(yàn)將115份血清樣本確定為原發(fā)性或繼發(fā)性登革熱感染。 該試驗(yàn)組由23份原發(fā)性和92份繼發(fā)性登革熱樣本構(gòu)成,。

登革熱IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑盒