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液相色譜知識(shí)科普
一,、什么是色譜呢?
色譜的本質(zhì)是一種分離分析方法。常見(jiàn)的分離方法有蒸餾,、離心,、電泳、過(guò)濾等,。色譜是目前有效的分離方法之一。
色譜法的原理：
利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解,、分配、吸附等性質(zhì)的差異,，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),，使各組分在兩相中反復(fù)多次受到各作用力而達(dá)到相互分離,。
兩相中有一相是固定的，叫作固定相(Stationary Phase),，有一相是流動(dòng)的，稱(chēng)為流動(dòng)相(phase),，流動(dòng)相又叫洗脫劑,、溶劑。
相(Phase)：物理化學(xué)術(shù)語(yǔ),，特指在某一系統(tǒng)中,，具有相同成分及相同物理、化學(xué)性質(zhì)的均勻物質(zhì),。各相之間有明顯可分的界面。
二,、液相色譜儀的組成
1,、輸液系統(tǒng)
包括溶劑柜、真空脫氣機(jī),、溶劑混合器,、高壓泵等,，其中核心部分是泵；泵的作用提供足夠的驅(qū)動(dòng)力使流動(dòng)相通過(guò)填充緊密的色譜柱,。
洗脫方式也分為兩種：
（1）等度洗脫：在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定,，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品,。
（2）梯度洗脫：采用兩種（或多種）不同極性的溶劑,，在分離過(guò)程中按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相的濃度配比和極性的一種洗脫模式,。用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品,。
2,、進(jìn)樣系統(tǒng)
把分析試樣有效地送入色譜柱進(jìn)行分離。一般有自動(dòng)進(jìn)樣器和手動(dòng)進(jìn)樣器,，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5-10倍（少3倍）,。
3,、分離系統(tǒng)
主要是色譜柱,，色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼,、塑料,、玻璃等,，其尺寸（內(nèi)徑、長(zhǎng)短）不盡相同,；色譜柱填料主要有硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì),，填料的粒徑不盡相同。
4,、檢測(cè)器
對(duì)檢測(cè)器的要求：靈敏度高、重現(xiàn)性好,、線性范圍寬,、死體積小、對(duì)溫度及流量的變化不敏感等,。主要有紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器,、示差檢測(cè)器等,。
示差檢測(cè)器是一種通用型檢測(cè)器，理論上可以檢測(cè)幾乎所有的化合物,。其原理是基于含樣品的洗脫劑和洗脫劑二者折光指數(shù)的差異,。示差檢測(cè)器受壓力變化,、溫度變化,、流動(dòng)脈沖的影響較大,，不適合進(jìn)行梯度洗脫。
三,、液相色譜儀操作流程
1,、開(kāi)機(jī)：依次打開(kāi)脫氣機(jī)、色譜泵,、檢測(cè)器,、計(jì)算機(jī)電源；待各設(shè)備自檢正常后,，啟動(dòng)色譜管理系統(tǒng)。
2,、流動(dòng)相準(zhǔn)備：過(guò)濾,，脫氣。
3,、色譜泵排氣
4,、安裝色譜柱
5,、平衡流動(dòng)相（有機(jī)溶劑與緩沖鹽溶液切換時(shí)等易產(chǎn)生沉淀，需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)）
6,、數(shù)據(jù)采集,、進(jìn)樣
7、沖洗管路及色譜柱
8,、數(shù)據(jù)處理
9,、關(guān)機(jī)
10,、記錄相關(guān)信息
四、液相色譜圖名詞術(shù)語(yǔ)
色譜峰(Peak):色譜柱流出組分通過(guò)檢測(cè)器時(shí)產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào),。
峰底(Peak Base):峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線,。
峰高(Peak Height):峰大值到峰底的距離,。
切線峰寬(Peak Width):在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)之間的距離。
半(高)峰寬(Peak Width at Half Height):通過(guò)峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線,，其與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離,。
峰面積(Peak Area):峰與峰底之間的面積，又稱(chēng)響應(yīng)值,。