超液相進(jìn)樣器故障知多少,?
超高效液相進(jìn)樣器故障知多少?
超高效液相進(jìn)樣器分為FTN與FL兩類,。H-Class與部分I-Class儀器使用FTN進(jìn)樣器,,經(jīng)典款UPLC和部分I-Class儀器使用FL進(jìn)樣器。
FL進(jìn)樣器
FL全稱為Fixed Loop,,即固定定量環(huán)型,。它有不充滿定量環(huán)(使用針溢出,默認(rèn)進(jìn)樣模式),、不充滿定量環(huán)和充滿定量環(huán)3種進(jìn)樣模式,。根據(jù)定量環(huán)體積差異,每種模式均有各自推薦的進(jìn)樣體積范圍,。
三種進(jìn)樣方式在不同定量環(huán)下推薦的進(jìn)樣體積范圍表:
定量環(huán)體積 不充滿定量環(huán)(使用針溢出)模式 (µL) 不充滿定量環(huán)模式 (µL) 充滿定量環(huán)模式 (µL)
建議按照推薦表使用,,否則峰面積重現(xiàn)性可能會(huì)達(dá)不到理想狀態(tài)。
FL與FTN工作原理不同,其樣品流路處于低壓體系中,。
為止擴(kuò)散效應(yīng),,吸樣前會(huì)先吸取小段空氣,吸樣后再吸取一段空氣,,樣品兩端的氣泡將樣品與針內(nèi)溶劑(弱洗液)進(jìn)行隔離,。完成上述步驟后進(jìn)樣針進(jìn)入清洗臺(tái)密封圈,樣品流路形成密閉環(huán)路,,弱洗溶液自下而上推動(dòng)液流產(chǎn)生約150 psi壓力將氣泡壓縮并推動(dòng)樣品至六通閥,。因此,環(huán)路密閉與充滿液體是進(jìn)樣器正常工作的前提,。
若保留時(shí)間穩(wěn)定
峰面積重現(xiàn)性差的原因是定量不準(zhǔn),。樣品量不應(yīng)過滿,防瓶內(nèi)負(fù)壓導(dǎo)致吸樣不準(zhǔn),,一般建議樣品占樣品瓶的2/3,。其次,清除溶劑充足的前提下,,灌注注射器20-30個(gè)來回,,保注射器內(nèi)無氣泡。
若保留時(shí)間不佳
當(dāng)保留時(shí)間與峰面積重現(xiàn)性都差,,至不出峰時(shí),,可先執(zhí)行泵頭滲漏測試(Leak Test)排泵的影響,注意截止點(diǎn)選擇“排放閥(Vent Valve)”,。
日常使用中,,F(xiàn)L常見的報(bào)錯(cuò)就是”樣品壓力低”(Sample Pressure Low),即無法壓縮產(chǎn)生約150 psi的壓力,。由進(jìn)樣工作原理我們?nèi)菀渍业娇赡艿墓收显颍?)弱洗注射器未充滿液體
2)進(jìn)樣針彎折
3)密封圈磨損,。
針對(duì)上述常見問題我們建議用戶:
1)使用前充灌注注射器,保充滿液體,。
2)使用預(yù)開口進(jìn)樣瓶,防針扎彎
3)清洗溶劑免添加緩沖鹽,,防鹽析磨損密封圈,。
1)針與底座內(nèi)的針密封均屬于易損易耗件,建議定期換,。
2)強(qiáng)洗溶劑一般使用高比例的有機(jī)相,。
3)弱洗溶劑一般使用高比例的水,成分與流動(dòng)相初始比例接近,,否則可能會(huì)導(dǎo)致峰前延,。
4)清洗溶劑要求可以溶解樣品且沒有鹽,否則會(huì)在針外壁形成鹽析,磨損針密封,,縮短其壽命,。
5)長時(shí)間不使用儀器,再次啟用應(yīng)充分灌注系統(tǒng),。