您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
你需要了解的的色譜,！
你需要了解的的色譜！
液相色譜是一類分離與分析,，是以液體作為流動(dòng)相,，固定相可以有多種形式，如紙,、薄板和填充床等,。在色譜發(fā)展的過(guò)程中．為了區(qū)分多種方法,，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜,、薄層色譜和柱液相色譜,。
液相色譜有很多種類，其中正相色譜是先被發(fā)明出來(lái)的,，它的特點(diǎn)是色譜柱里固定相極性大于流動(dòng)相的極性。
在正相色譜中,，流動(dòng)相是弱極性的,，比如正己烷，石油醚等,。
而固定相是有極性的,，比如硅羥基的硅膠。
這些極性的硅羥基就像賽道兩邊的小手,，和進(jìn)入色譜柱的化合物發(fā)生相互作用,。根據(jù)相似相溶原理，極性大的化合物和小手的作用強(qiáng),，出峰就會(huì)慢一些。極性弱的化合物與硅羥基彼此不感興趣,，出峰就會(huì)快一些,。
在化學(xué)家掌握了硅膠的化學(xué)鍵合之后，反相色譜得到了很大的發(fā)展,。正如其名,，反相色譜就是和正相色譜反過(guò)來(lái),。
它的流動(dòng)相是強(qiáng)極性的,，比如甲醇/水。
而固定相是弱極性的,，比如十八烷基鍵合硅膠柱,，也叫C18柱，就是把硅膠上原本的硅羥基變成了一條碳十八的長(zhǎng)鏈,。
這樣一來(lái)硅膠表面就從強(qiáng)極性變成了弱極性。
雖然正相色譜是先發(fā)明的,，但使用并不普遍?，F(xiàn)在，反相色譜的應(yīng)用占到了液相應(yīng)用的80以上,。這是為什么呢,？
一來(lái),，反相色譜的流動(dòng)相不需要烴類、LV仿這些危險(xiǎn)的有機(jī)溶劑,，使用起來(lái)更加簡(jiǎn)單和全,。
二來(lái)，液相和氣相是互相補(bǔ)充,。極性弱,，沸點(diǎn)低的化合物優(yōu)先用氣相分析。而極性強(qiáng)的化合物由于分子間作用力強(qiáng),，往往沸點(diǎn)不低,，不適合用氣相分析，適合用反相液相色譜分析,。
另外,，反相色譜的流動(dòng)相有多的參數(shù)選擇,，比如pH、緩沖鹽的種類和濃度等,，能好地調(diào)整分離,，而正相色譜可調(diào)整的流動(dòng)相參數(shù)是有限。
此外,，還有一些化合物,，既不適合用正相分析,，也不適合用反相分析,，比如糖類。
因?yàn)樘穷愑泻芏嗔u基,，極性很強(qiáng),。
若用反相分析，糖和C18沒有相互作用,，出峰太快，無(wú)法分離,。若用正相分析,，糖類又不能溶解在正己烷這種非極性的流動(dòng)相里，也無(wú)法分離,。這種情況,，我們可以嘗試使用親水作用色譜,，HILIC模式。近幾年關(guān)于LCMS的HILIC應(yīng)用研究熱門,，它使用類似于正相的色譜柱,，比如硅膠，和傳統(tǒng)反相的流動(dòng)相，比如乙腈/水,。
這樣的組合即能夠溶解樣品,，又能夠保留樣品,，終使樣品得到好的分離。
如果化合物的極性強(qiáng),，一言不合就電離,。
還可以選擇離子對(duì)色譜，或者離子交換色譜,，來(lái)增離子和固定相的相互作用，使不同的化合物得到分離,。
離子交換色譜
離子交換色譜通常用離子交換樹脂作為固定相,。一般是樣品離子與固定相離子進(jìn)行可逆交換，由于各組分離子的交換能力不同,，從而達(dá)到色譜的分離。
離子交換色譜法是新發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)現(xiàn)代分析,，已大范圍用于氨基酸,、蛋白質(zhì)的分析，也適合于某些無(wú)機(jī)離子(N03-,、SO42-,、Cl-等無(wú)機(jī)陰離子和Na+,、Ca2+、Mg2+,、K+等無(wú)機(jī)陽(yáng)離子)的分離和分析,，具有重要的作用。
凝膠色譜
不管是正相,、反相還是離子交換色譜，化合物出峰的情況都是和極性相關(guān)的,，而凝膠色譜的出峰卻只和化合物的大小有關(guān),，所以也叫體積排阻色譜。
當(dāng)樣品流經(jīng)凝膠色譜柱時(shí),，直徑較大的化合物,，不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，所以很快出峰,。而直徑較小的化合物會(huì)進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，并不斷的進(jìn)出和擴(kuò)散,，因此,，較晚出峰。
目前,，凝膠色譜法既適用于水溶液的體系,，又適用于有機(jī)溶劑的體系,。當(dāng)所用的洗脫劑為水溶液時(shí)，稱為凝膠過(guò)濾色譜,，其在生物界的應(yīng)用比較多,；采用有機(jī)溶劑為洗脫劑時(shí)，稱為凝膠滲透色譜,，在高分子領(lǐng)域應(yīng)用較多,。