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色譜柱的預(yù)防措施
在液相色譜的使用中,，我們會發(fā)現(xiàn)很多實驗室會面臨色譜柱頻繁損壞的問題,。所以，這次我們就來討論一下色譜柱的預(yù)防措施吧,。
影響色譜柱使用的因素
1.流動相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍,。其實，在工作過程中大多數(shù)的顆粒物堵塞導(dǎo)致的色譜柱背壓升高問題是體現(xiàn)在柱頭堵塞,。當(dāng)流動相pH超出堿性范圍時,，會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子;當(dāng)流動相pH值超出酸性范圍時，鍵合相易發(fā)生水解而流失,，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng),，特別是在溫度較高(>40℃)的環(huán)境下，會使柱效迅速降低而報廢,。
而樣品的易吸附機(jī)制也可能會和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高,。但是這種情況在較低的PH系統(tǒng)中會有所改善，因為較低的PH系統(tǒng)會降低硅膠表面的硅醇基發(fā)生解離,。
2.流動相變質(zhì)
當(dāng)前使用為廣泛的是硅基鍵合相填料,，當(dāng)以水溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時，水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出一些細(xì)菌或霉菌,，從而堵塞固定相顆粒間的空隙,。特別是對于多元自動比例混合的液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯，因存放時間較長而容易發(fā)生此類問題,。
3. 流動相純度
目前,，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用。
4.其它因素
影響色譜柱壽命的因素很多,，除流動相和樣品因素外,，還有其它一些外在因素，如,，柱壓的影響,，溫度的影響，色譜柱的正確沖洗,，色譜柱的正確安裝等,。
預(yù)防措施
為了降低色譜柱的損傷問題，大家在使用色譜柱時可以做一些預(yù)防,。例如：
1在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器
在線過濾器的內(nèi)部顆?？障兑话闶?.5微米，對于UHPLC會選擇0.2微米空隙的在線過濾器,。這個空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小,。
所以，在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品,、泵頭密封墊,、自動進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物,，以防止柱頭過濾篩板的堵塞。
2在柱子前端使用保護(hù)柱
保護(hù)柱有很多種,，通用型,、一體式、卡套式,，但是它其實是一個和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子,。
因為它具有和分析柱相同的內(nèi)部填料，所以保護(hù)柱不僅可以阻隔顆粒物,，還可以阻隔易吸附的樣品基質(zhì)組分,。
3對樣品進(jìn)行凈化處理
有一些液相的分析方法沒有明確標(biāo)注樣品的凈化，但希望大家在做分析時都能夠考慮樣品的凈化,，常用的方案是對樣品進(jìn)行過濾,。
色譜柱損壞的簡單消除方法
由于化學(xué)損壞多發(fā)于色譜柱的前端，因此把色譜柱的前端修整或切割掉1/2-1 米通?？梢韵猩V方面的故障,。在更為嚴(yán)重的情況下，可能需要切割掉5 米或更長的一段,。使用保護(hù)柱或保留間隙柱會將對色譜柱的損壞降至小,，但是，需要經(jīng)常修整保護(hù)柱,。酸或堿常常會破壞熔融石英管線的脫活表面,，從而引起活性化合物的峰形變壞。
保存
實驗結(jié)束后,，色譜柱的合理保存也是保護(hù)色譜柱的關(guān)鍵,，同時也是影響色譜柱使用壽命的關(guān)鍵。
1,、短期保存
應(yīng)保存在接近常用的流動相條件下,，并且移除系統(tǒng)中的緩沖鹽、酸等,。
2、長期保存
將色譜柱按照說明書保存在對應(yīng)的溶劑中,，并且將色譜柱從系統(tǒng)中去下,，兩頭用堵頭密封。