O型口蹄疫抗體檢測試劑盒

1 抗原預(yù)包被板條 1/2塊 7 終止液 6ml

2 酶結(jié)合物 5/10ml 8 陰性對照 800μl

3 10倍濃縮洗滌液 50ml 9 陽性對照 400/800μl

4 底物A液 6ml 10 封板膜 2/4張

5 底物B液 6ml 11 說明書 1份

6 樣本稀釋液 50ml 12    

O型口蹄疫抗體檢測試劑盒用于檢測豬,、牛、羊血清中的口蹄疫病毒抗體,，用于評估口蹄疫苗免疫狀況,。

需自備的設(shè)備及試劑

1.微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl,。

2.一次性移液器吸頭,。

3.量筒：500ml。

4 96孔板酶標儀。

5.蒸餾水或去離子水,。

6.洗瓶或洗板機,。

樣品制備

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血。

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,，如有鹽結(jié)晶,，搖動使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項

1.試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，使用前應(yīng)搖勻,，使用后放回2-8℃。

2.不同品種,、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。

3.底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,，使用時應(yīng)該注意防護,。

4.TMB（底物B液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5.檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2-8℃),。

6.所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7.嚴格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果,。操作過程中移液,、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8.抗原包被板為一次性用品,，不得重復(fù)使用,；

操作步驟

1.每次試驗均設(shè)置空白孔1孔、陽性對照1孔,、陰性對照2孔,；

2.將樣品稀釋液按50ul/孔加入到微孔反應(yīng)板內(nèi)，之后將待檢樣品血清,、陰性對照,、陽性對照按50ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請勿混用）；

3.蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪）,，置37℃溫育60分鐘,。

4.小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,，加滿液體后停留1分鐘,，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)3次,，*在干凈吸水紙上拍干,。

5.每孔加酶結(jié)合物50μl，蓋上封板膜,，置37℃溫育60分鐘,。

6.小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，洗滌3次, 方法同4,。切記*在干凈吸水紙上拍干。

7.每孔先加底物A液50μl,、再加底物B液50μl,，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘,。

8.每孔加終止液50μl,，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果,。

結(jié)果判定

以空白對照調(diào)零用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值,。

試驗成立的條件是：

N值>0.8、P值<0.4,；

計算方法：

PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）

陰陽性判斷：

牛,、羊樣本

PI(阻斷率)>45%則判斷為陽性；

PI≤45%則判斷為陰性,。

豬樣本

PI(阻斷率)>35%則判斷為陽性,；

PI≤35%則判斷為陰性。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存,。

有效期： 12個月,。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月,。

口蹄疫是豬,、牛、羊等主要家畜和其它家養(yǎng),、野生偶蹄動物共患的一種急性,、熱性、高度接觸性傳染病,，易感動物達70多種,。臨床特征是在口腔黏膜,、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰性疹。該病傳播途徑多,、速度快,，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治,、經(jīng)濟損失,。鑒于此，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病,。目前,，有三分之二的 OIE 成員國流行 FMD，時刻威脅著無 FMD 國家和地區(qū)的家畜安全和畜產(chǎn)品貿(mào)易,?？谔阋卟《緦儆谖⒑颂呛怂岵《究瓶谔阋卟《緦佟Ｆ?顆粒直徑為23納米,，小顆粒直徑為7—8納米,。目前已知口蹄疫病毒在*有七個主型 A,、O,、C、南非1,、南非2,、南非3、亞洲1