狂犬病毒抗體檢測試劑盒

狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗體檢測試劑盒用于檢測貓,、犬等動物血清中的狂犬病毒抗體，用于評估狂犬病毒疫苗免疫狀況,。

狂犬病毒抗體檢測試劑盒采用阻斷ELISA法,，在酶標板條微孔上預包被狂犬病毒抗原,。在試驗中,，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后,，若樣品中含有狂犬病毒特異性抗體,，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,；再加入酶標的抗狂犬病毒單抗,，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合；經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,；在微孔中加入TMB底物液,，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后,，用酶標儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值,。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1. 微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl,。

2. 一次性移液器吸頭,。

3. 量筒：500ml。

4. 96孔板酶標儀,。

5. 蒸餾水或去離子水,。

6. 洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血,，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,。

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復至室溫,，如有鹽結(jié)晶，搖動使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項

1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上,。使用前應(yīng)搖勻,，使用后放回2-8℃。

2. 不同品種,、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。

3. 終止液對皮膚和眼可能有刺激性,，使用時應(yīng)該注意防護,。

4. TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2-8℃),。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7. 嚴格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果,。操作過程中移液,、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 抗原包被板為一次性用品,，不得重復使用,；

操作步驟

1. 每次試驗均設(shè)置陽性對照1孔、陰性對照2孔,，陰,、陽性對照不用稀釋，直接取100ul加入反應(yīng)孔,。

2. 將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應(yīng)板內(nèi),，之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請勿混用）；

3. 蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪）,，置37℃溫育60分鐘,。

4. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復4-6次,，*在干凈吸水紙上拍干,。

5. 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘,。

6. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，洗滌4-6次, 方法同4,。切記*在干凈吸水紙上拍干,。

7. 每孔加顯色液100μl，混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘,。

8. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止,，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果,。

結(jié)果判定

用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

陰性對照（N）OD值>0.5,，同時陽性對照(P)阻斷率>50%,；

計算方法：

PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值）

陰陽性判斷：

PI(阻斷率)>40%則判斷為陽性；

PI≤40%則判斷為陰性,。

注：（PI=40%相當于抗體滴度0.5IU/ml）

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存,。

有效期： 12個月。