禽白血病病毒（ELISA法）檢測試劑盒

本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測,。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（DAS-ELISA）原理來檢測禽白血病病毒的P27抗原。檢測時,，在相應的反應孔中加入陰,、陽對照品和待測樣品，經(jīng)溫育后,，若樣品中含有P27抗原,，則與酶標板上的抗體結合形成抗原抗體復合物，反之則不能結合,。洗滌后,，加入的酶標記物與包被板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,。再次洗滌后加入底物，酶催化底物反應呈現(xiàn)藍色,，顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關,，從而達到快速檢測的目的。

操作方法

一：禽白血病病毒（ELISA法）檢測試劑盒試劑配制

a）0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液：準確稱取氯化鈉 8.0 g,、磷酸氫.二鈉1.14 g和磷酸.二氫鉀0.24 g,，加入去離子水溶解并定容至1 L。

b）洗滌工作液：使用前,，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20-25℃）,，并搖動，使沉淀溶解（*在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5-10 min）,，然后用蒸餾水作25 倍稀釋（例如：30 mL 的濃縮洗滌液加上 720 mL 蒸餾水）勻,，稀釋好的洗滌液2-8℃可存放7日。

二：禽白血病病毒（ELISA法）檢測試劑盒樣品處理

蛋清：取全蛋,，破碎后,，直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子：取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣,，然后放入1 mL PBS溶液（0.01mol/L,，pH 值 7.4）中，-20℃以下冰箱中凍融一次,，待其恢復至室溫后,，取 100 μL 進行檢測。 疫苗：疫苗稀釋液將疫苗溶解,，再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后,，取100μL進行檢測。 胎糞：無需稀釋,，可以直接用于檢測,，若樣品中含有沉淀或雜質，需在2000-3000 r/min,，離心 10 min,，取 100 μL 上清進行檢測。

三：操作步驟

取酶標板（根據(jù)樣品*,，可拆開分次使用）,，陰性對照、陽性對照和待檢樣品各取100 μL加至相應微孔中,，蓋好蓋板膜,，輕輕振蕩酶標板10 s，充分混

勻,，室溫下（25±2℃）避光反應60 min,。

注：陰,、陽性對照各設2孔，待檢樣品設1孔,。

禽白血病病毒（ELISA法）檢測試劑盒甩掉孔中的溶液,，每孔加入稀釋好的洗滌液300μL，震蕩洗滌4次,，每次30s 左右,，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。 每孔加入100μL酶標記物工作液,，蓋好蓋板膜,，室溫下（25±2℃）避光反應60 min。 棄去孔中的溶液,，洗滌4次,，方法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻,，加入孔中,，100 μL/孔，蓋上蓋板膜,，室溫下（25±2℃）反應15 min,。

注：底物工作液也可提前配制，但配制完后需5 min內使用,。

每孔加入終止液100μL,，5 min內測定結果,。

注：若終止液出現(xiàn)絮狀結晶,，可37℃加熱，待其溶解后使用,。

結果判定

在酶標儀上讀各孔OD650nm值,，計算出陰性對照孔OD均值NC和陽性對照孔OD均值PC。

注：NC值＜0.200且0.500＜PC值≤2.000,，試驗結果才有效,。否則，應進行重復試驗,。

按照公式計算出S/P值：S/P=（SC-NC）/（PC-NC）,。

注：SC為被檢樣品孔OD值。

如果S/P＜0.17,，說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白,；如果S/P≥0.17，說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白,。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存,。

有效期： 12個月,。