禽白血病病毒抗原檢測試劑盒

組份

1 預包被板條 1/2塊 7 陰性對照 2ml

2 酶結合物 11/22ml 8 陽性對照 2ml

3 25倍濃縮洗滌液 30/60ml 9 封板膜 2/4張

4 底物A液 8/16ml 10 說明書 1份

5 底物B液 8/16ml      

6 終止液 6/11ml      

本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（DAS-ELISA）原理來檢測禽白血病病毒的P27抗原,。檢測時,，在相應的反應孔中加入陰、陽對照品和待測樣品,，經溫育后,，若樣品中含有P27抗原，則與酶標板上的抗體結合形成抗原抗體復合物,，反之則不能結合,。洗滌后，加入的酶標記物與包被板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,。再次洗滌后加入底物,，酶催化底物反應呈現(xiàn)藍色，顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關,，從而達到快速檢測的目的,。

需自備的設備及試劑

酶標儀（650 nm）、去離子水,、離心管,、微量移液器、計時器,、離心機（4000r/min）,、棉簽、氯化鈉、  ,、磷酸氫二鈉,、磷酸二氫鉀等。

注意事項

  本品僅供體外檢測使用,。

  不同批號試劑盒中的組份不可混用,。

勿使用過期的試劑盒，已開封的組份應在有效期內       使用,。

必須使用符合藥典規(guī)定的水（如蒸餾水,、去離子水或純水）稀釋洗滌液。

試劑盒各組份在使用前應預先平衡至室溫（25±2℃）,。

未使用的酶標板應放回鋁箔袋并封口,，2-8℃保存。

應避免使用金屬類物質盛裝和攪拌試劑,。

勿將底物溶液暴露于強光下,。

本品終止液為強酸，避免同眼,、皮膚接觸,。

移液系統(tǒng)應保證準確清潔，應提供準確溶液體積的同時不造成交叉污染,。

操作方法

一：試劑配制

a）0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液：準確稱取氯化鈉 8.0 g,、   0.2 g、磷酸氫二鈉1.14 g和磷酸二氫鉀0.24 g,，加入去離子水溶解并定容至1 L,。

b）洗滌工作液：使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20-25℃）,，并搖動,，使沉淀溶解（*在37℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5-10 min），然后用蒸餾水作25 倍稀釋（例如：30 mL 的濃縮洗滌液加上 720 mL 蒸餾水）勻,，稀釋好的洗滌液2-8℃可存放7日,。

二：樣品處理

蛋清：取全蛋，破碎后,，直接取蛋清100μL,。 泄殖腔拭子：取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣，然后放入1 mL PBS溶液（0.01mol/L,，pH 值 7.4）中,，-20℃以下冰箱中凍融一次，待其恢復至室溫后,，取 100 μL 進行檢測,。 疫苗：疫苗稀釋液將疫苗溶解,，再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后，取100μL進行檢測,。 胎糞：無需稀釋,，可以直接用于檢測，若樣品中含有沉淀或雜質,，需在2000-3000 r/min,，離心 10 min,，取 100 μL 上清進行檢測,。

三：操作步驟

取酶標板（根據樣品多少，可拆開分次使用）,，陰性對照,、陽性對照和待檢樣品各取100 μL加至相應微孔中，蓋好蓋板膜,，輕輕振蕩酶標板10 s,，充分混

勻，室溫下（25±2℃）避光反應60 min,。

注：陰,、陽性對照各設2孔，待檢樣品設1孔,。

甩掉孔中的溶液,，每孔加入稀釋好的洗滌液300μL，震蕩洗滌4次,，每次30s 左右,，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。 每孔加入100μL酶標記物工作液,，蓋好蓋板膜,，室溫下（25±2℃）避光反應60 min。 棄去孔中的溶液,，洗滌4次,，方法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻,，加入孔中,，100 μL/孔，蓋上蓋板膜,，室溫下（25±2℃）反應15 min,。

注：底物工作液也可提前配制，但配制完后需5 min內使用,。

每孔加入終止液100μL,，5 min內測定結果。

注：若終止液出現(xiàn)絮狀結晶，可37℃加熱,，待其溶解后使用,。

結果判定

在酶標儀上讀各孔OD650nm值，計算出陰性對照孔OD均值NC和陽性對照孔OD均值PC,。

注：NC值＜0.200且0.500＜PC值≤2.000,，試驗結果才有效。否則,，應進行重復試驗,。

按照公式計算出S/P值：S/P=（SC-NC）/（PC-NC）。

注：SC為被檢樣品孔OD值,。

如果S/P＜0.17,，說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白；如果S/P≥0.17,，說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白,。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月,。

禽白血病是由禽C型反錄病毒群的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱,，主要是淋巴細胞性白血病，其次是成紅細胞性白血病,、成髓細胞性白血病,。此外還可引起骨髓細胞瘤、結締組織瘤,、上皮腫瘤,、內皮腫瘤等。大多數(shù)腫瘤侵害造血系統(tǒng),，少數(shù)侵害其他組織