A型口蹄疫抗體檢測試劑盒

使用說明書

【介紹】

A型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗體檢測試劑盒可用于檢測豬,、牛,、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗體，用于評估A型口蹄疫苗免疫狀況,。

本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標板條微孔上預包被純化的FMD病毒抗原。在試驗中,，加入稀釋后的待檢血清,，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有FMD病毒特異性抗體,，則與包被板上的抗原結合,，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶結合物,，與檢測板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物；在微孔中加入TMB底物液,，經(jīng)酶催化形成藍色產(chǎn)物,，加入終止液終止反應后，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值,。

【組份】

【需自備的設備及試劑】

微量移液器： 0.5µl-10µl,、10µl-100µl、100µl-1000µl,。

一次性移液器吸頭,。量筒：500ml,。96孔板酶標儀。蒸餾水或去離子水,。洗瓶或洗板機,。

【樣品制備】

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血。

【洗滌液的準備】

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,，如有鹽結晶,，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。

【樣品的稀釋】

在血清稀釋板中按1：100的體積比稀釋待檢血清。

注意：陰性和陽性對照不用稀釋,。取每個樣品后都要更換吸頭,，準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻,。

【注意事項】

試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,，應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻,，使用后放回2-8℃,。

不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時應防止試劑污染,。

底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護,。

TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑,。

檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃),。

所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染,。

嚴格遵守操作說明可以獲得很好的結果。操作過程中移液,、定時和洗滌等的全部過程必須精確,。

血清稀釋板為一次性用品，不得重復使用,；血清稀釋板的大容量為300μl/孔,。

【操作步驟】

取預包被的檢測板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用）,，將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中,。同時設陰性對照和陽性對照各2孔,，取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應孔中輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪）,，置37℃溫育30分鐘,。

小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,，后甩去孔內液體，以上步驟重復4-6次,，后在干凈吸水紙上拍干,。

每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘。

小心揭開封板膜,，甩掉板孔中的溶液,，洗滌4-6次, 方法同3。切記后在干凈吸水紙上拍干,。

每孔加顯色液100µl,，輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘,。

每孔加終止液50μl,，使反應終止，10分鐘內測定結果,。

【結果判定】

用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值,。

試驗成立的條件是：

陰性對照（N）OD值<0.20，同時陽性對照（P）OD值>0.3,。

計算方法：

（樣品OD值-陰性OD均值）÷（陽性對照OD均值-陰性OD均值）=  IRPC值

陰陽性判斷：

IRPC<0.4判為陰性;0.4≤IRPC<0.45判為可疑,；IRPC≥0.45則判斷為陽性。

【有效期】

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存有效期為 12個月,。