本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞白痢雞傷寒抗原,。在試驗中,，加入稀釋后的待檢血清,，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有雞白痢雞傷寒特異性抗體,，則與包被板上的抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗,，與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液,，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物,，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔

96t/192t 1100/2200

雞白痢雞傷寒抗體檢測試劑盒

雞白?。?/span>Pullorum Disease,PD）雞傷寒（Fowl Typhoid,FT）抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的雞白痢雞傷寒抗體,，用于雞群的雞白痢雞傷寒的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法,，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被雞白痢雞傷寒抗原,。在試驗中，加入稀釋后的待檢血清,，經(jīng)過溫育后,，若樣品中含有雞白痢雞傷寒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,；再加入酶標(biāo)二抗,，與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,；在微孔中加入TMB底物液,，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后,，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值,。

組份                    

1	抗原預(yù)包被板條	1/2塊	7	終止液	6/11ml
2	酶結(jié)合物	11/21ml	8	陰性對照	0.8/1.6ml
3	10倍濃縮洗滌液	50ml	9	陽性對照	0.8/1.6ml
4	底物A液	6/11ml	10	血清稀釋	1/2塊
5	底物B液	6/11ml	11	封板膜	2/4張
6	樣本稀釋液	50/100ml	12	說明書	1份

需自備的設(shè)備及試劑

微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl,、100µl-1000µl,。

一次性移液器吸頭。

量筒：500ml,。

96孔板酶標(biāo)儀,。

蒸餾水或去離子水。

洗瓶或洗板機(jī),。

樣品制備

取動物全血,，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶,，搖動使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：99的體積比稀釋待檢血清（例如：495μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清）,。

注意：陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,，準(zhǔn)確記錄每個樣品在板上的位置,。每個樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。

注意事項

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，使用前應(yīng)搖勻,，使用后放回2-8℃。

不同品種,、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。

底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,，使用時應(yīng)該注意防護(hù),。

TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑,。

檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2～8℃),。

所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染,。

嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得很好的結(jié)果。操作過程中移液,、定時和洗滌等的全部過程必須精確,。

血清稀釋板為一次性用品,，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的大容量為300μl/孔,。

操作步驟

1. 取預(yù)包被的檢測板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用）,，將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中,。同時設(shè)陰性、陽性及空白對照各1孔,，取陰性及陽性對照各100μl

分別加入反應(yīng)孔中,，空白對照僅加入100μl樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）,。

2. 蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘。

3. 小心揭開封板膜,，甩掉板孔中的溶液,，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，加滿液體后停留1分鐘,，后甩去孔內(nèi)液體,，以上步驟重復(fù)3次，后在干凈吸水紙上拍干,。

4. 每孔加酶結(jié)合物100μl,，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘,。

5. 小心揭開封板膜,，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同3,。切記后在干凈吸水紙上拍干,。

6. 每孔先加底物液50µl、再加顯色液50µl,，混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘,。

1. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止,，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果,。

結(jié)果判定

以空白對照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大于或等于0.5,，陰性對照孔A450值必須小于0.15,。如果試驗無效，試驗中的操作值得懷疑,，試驗應(yīng)重做,，并仔細(xì)檢察各組分。

樣品A450值大于0.2+陰性對照孔均值,，判為陽性,；樣品A450值小于0.2+陰性對照孔均值，判為陰性,；如陰性對照孔均值小于0.05按0.05計算,。

貯存方法： 2 - 8ºC下貯存。

有效期： 12個月,。