雞禽流感病毒抗體檢測(cè)試劑盒

1 抗原預(yù)包被板條 1塊 7 終止液 6ml

2 酶結(jié)合物 12ml 8 陰性對(duì)照 800μl

3 10倍濃縮洗滌液 50ml 9 陽(yáng)性對(duì)照 800μl

4 底物A液 6ml 10 血清稀釋 1塊

5 底物B液 6ml 11 封板膜 2張

6 樣本稀釋液 50ml 12 說(shuō)明書(shū) 1份

檢測(cè)雞血清中的禽流感病毒抗體，用于評(píng)估養(yǎng)雞場(chǎng)雞禽流感疫苗免疫狀況及感染雞的血清學(xué)輔助診斷,。

需自備的設(shè)備及試劑

微量移液器： 0.5μl～10μl,、10μl～100μl、100μl～1000μl,。 一次性移液器吸頭,。 量筒：500ml。 96孔板酶標(biāo)儀,。 蒸餾水或去離子水,。 洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血,，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無(wú)溶血,。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：101的體積比稀釋待檢血清（例如：200μl樣品稀釋液中加2μl待檢血清）。

注意：陰性和陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋,。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭,，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻,。

注意事項(xiàng)

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2～8℃,。 不同品種,、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染,。 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。 TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑,。 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2～8℃)。 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染,。 嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得*的結(jié)果,。操作過(guò)程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精確,。 血清稀釋板為一次性用品,，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的*容量為300μl/孔,。

操作步驟

取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少,，可拆開(kāi)分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測(cè)板孔中,。同時(shí)設(shè)陰性,、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔，取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl

分別加入反應(yīng)孔中,，空白對(duì)照僅加入100μl樣本稀釋液,。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘,。 小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液,，用洗滌液洗3次,。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl），靜置1分鐘后甩掉,。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干,。 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜,，置37℃溫育30分鐘,。 小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液,，洗滌3次, 方法同2,。切記*在干凈吸水紙上拍干。 每孔先加底物A液50μl,、再加底物B液50μl,，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘,。 每孔加終止液50μl,，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果,。

結(jié)果判定

以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度A值,。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔A450值大于或等于0.5，陰性對(duì)照孔A450值必須小于0.2,。如果試驗(yàn)無(wú)效,，試驗(yàn)中的操作值得懷疑，試驗(yàn)應(yīng)重做,，并仔細(xì)檢察各組分,。

樣品A450值大于0.25+陰性對(duì)照孔均值，判為陽(yáng)性,；樣品A450值小于0.25+陰性對(duì)照孔均值,，判為陰性；如陰性對(duì)照孔均值小于0.05按0.05計(jì)算,。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存,。

有效期： 12個(gè)月。

禽流感（Bird Flu或Avian Influenza）是由禽流感病毒引起的一種急性傳染病,，也能感染人類(lèi),，人感染后的癥狀主要表現(xiàn)為高熱、咳嗽,、流涕,、肌痛等，多數(shù)伴有嚴(yán)重的肺炎,，嚴(yán)重者心,、腎等多種臟器衰竭導(dǎo)致死亡，病死率很高,，通常人感染禽流感死亡率約為33%,。此病可通過(guò)消化道,、呼吸道、皮膚損傷和眼結(jié)膜等多種途徑傳播,，區(qū)域間的人員和車(chē)輛往來(lái)是傳播本病的重要途徑,。