O型口蹄疫檢測試劑盒

1 抗原預(yù)包被板條 1/2塊 7 終止液 6ml

2 酶結(jié)合物 5/10ml 8 陰性對(duì)照 800μl

3 10倍濃縮洗滌液 50ml 9 陽性對(duì)照 400/800μl

4 底物A液 6ml 10 封板膜 2/4張

5 底物B液 6ml 11 說明書 1份

6 樣本稀釋液 50ml 12    

O型口蹄疫檢測試劑盒用于檢測豬、牛,、羊血清中的口蹄疫病毒抗體,，用于評(píng)估口蹄疫苗免疫狀況,。

需自備的設(shè)備及試劑

1.微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl,。

2.一次性移液器吸頭,。

3.量筒：500ml。

4 96孔板酶標(biāo)儀,。

5.蒸餾水或去離子水,。

6.洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動(dòng)物全血,，按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項(xiàng)

1.試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,，使用前應(yīng)搖勻,，使用后放回2-8℃。

2.不同品種,、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用,，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3.底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。

4.TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑,。

5.檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,，并盡快置于2-8℃)。

6.所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染,。

7.嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果,。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確,。

8.抗原包被板為一次性用品,，不得重復(fù)使用；

操作步驟

1.每次試驗(yàn)均設(shè)置空白孔1孔,、陽性對(duì)照1孔,、陰性對(duì)照2孔；

2.將樣品稀釋液按50ul/孔加入到微孔反應(yīng)板內(nèi),，之后將待檢樣品血清,、陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照按50ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請(qǐng)勿混用）；

3.蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪）,，置37℃溫育60分鐘,。

4.小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液,，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,，加滿液體后停留1分鐘，后甩去孔內(nèi)液體,，以上步驟重復(fù)3次,，*在干凈吸水紙上拍干。

5.每孔加酶結(jié)合物50μl,，蓋上封板膜,，置37℃溫育60分鐘。

6.小心揭開封板膜,，甩掉板孔中的溶液,，洗滌3次, 方法同4。切記*在干凈吸水紙上拍干,。

7.每孔先加底物A液50μl,、再加底物B液50μl，混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘,。

8.每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止,，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果,。

結(jié)果判定

以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值。

試驗(yàn)成立的條件是：

N值>0.8,、P值<0.4,；

計(jì)算方法：

PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）

陰陽性判斷：

牛、羊樣本

PI(阻斷率)>45%則判斷為陽性,；

PI≤45%則判斷為陰性,。

豬樣本

PI(阻斷率)>35%則判斷為陽性；

PI≤35%則判斷為陰性,。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存,。

有效期： 12個(gè)月。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存,。

有效期： 12個(gè)月,。

口蹄疫是豬、牛、羊等主要家畜和其它家養(yǎng),、野生偶蹄動(dòng)物共患的一種急性,、熱性、高度接觸性傳染病,，易感動(dòng)物達(dá)70多種,。臨床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰性疹,。該病傳播途徑多,、速度快，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行,，造成巨大政治,、經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此,，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病,。目前，有三分之二的 OIE 成員國流行 FMD,，時(shí)刻威脅著無 FMD 國家和地區(qū)的家畜安全和畜產(chǎn)品貿(mào)易,。口蹄疫病毒屬于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒屬,。其*顆粒直徑為23納米,，小顆粒直徑為7—8納米。目前已知口蹄疫病毒在*有七個(gè)主型 A,、O,、C、南非1,、南非2,、南非3、亞洲1