尼氏染色(Nissl Staining)是用堿性染料染神經(jīng)組織的一種方法。尼氏體是胞質(zhì)內(nèi)的一種嗜堿性物質(zhì),,廣泛見于各種神經(jīng)元,,不同神經(jīng)元中的尼氏體形狀、大小和數(shù)量則各有差異,。用于尼氏染色的堿性染料主要有焦油紫,、亞甲藍(lán)、甲苯胺藍(lán)和硫堇等,。我室主要用焦油紫和硫堇染色,。尼氏染色法可以染出尼氏體,,用來觀察神經(jīng)元內(nèi)的細(xì)胞結(jié)構(gòu);還可以通過尼氏染色后對尼氏體的觀察來了解神經(jīng)元的損傷情況,。
尼氏染色原理:神經(jīng)元細(xì)胞體包括一個(gè)具有皺褶核膜的大細(xì)胞核,、稀疏的染色質(zhì)和一個(gè)明顯的核仁。在細(xì)胞體中細(xì)胞質(zhì)是尼氏顆粒,,即能夠代表粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點(diǎn)狀嗜堿性表現(xiàn)的嗜堿性顆粒,。尼氏顆粒可以用很多染色來顯示如中性紅,、亞甲基藍(lán),、甲苯胺藍(lán)和甲基紫等。染色的變異,、pH和分化的時(shí)間使一些染色既可以僅突出尼氏物質(zhì),,也可以顯示神經(jīng)元的細(xì)胞核和神經(jīng)膠質(zhì)。各種神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)都含有尼氏體,,但其形狀,、數(shù)量、分布位置常常不同,。尼氏體也存在于樹突中,,但不在于軸突和包體的軸丘。尼氏體會(huì)因?yàn)樯頎顟B(tài)的變化而變化,,尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)合成蛋白質(zhì)合成的重要部位,,當(dāng)神經(jīng)元受到刺激后,包體內(nèi)的尼氏體會(huì)明顯減少,。通常尼氏能被堿性染料如硫堇,、亞甲藍(lán)、甲苯胺藍(lán)和焦油紫等染料染成紫藍(lán)色,。常用的堿性染料有Cresyl violet (焦油紫,,甲酚紫,克紫),;thionine (硫荲),;tolridine blue (甲苯胺藍(lán))等
尼氏染色步驟:
1.常規(guī)脫蠟至水(二甲苯I、二甲苯II各15min,,然后梯度酒精脫水:100%I,、100%II、95%,、90%,、80%、70%、50%各5min)
2.蒸餾水沖洗3次,,每次5min
3.然后置于60℃溫箱用1%甲苯胺藍(lán)染色40 min(或用焦油紫染色30s)
4.蒸餾水洗凈染料后,,于分別置于70%,80%和95%以及100%乙醇中脫水,,再用二甲苯透明
5.后用中性樹膠封片,。
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