飽和油紅O染色液屬于偶氮染料,,是很強的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結合呈小脂滴狀,。脂溶性染料能溶于組織和細胞中的脂類,,它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當組織切片置人染液時,,染料則離開染液而溶于組織內的脂質(如脂滴)中,,使組織內的脂滴呈橘紅色。
一,、飽和油紅O染色液的配制
脂質(Lipid)是中性脂肪,、類脂及其衍生物的總稱,,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有機溶劑(如乙醇等),。人體的脂肪主要有兩種:1,、儲存脂肪,如中性脂肪,,主要分布于皮下,、腎、胰腺等部位,。2,、結構脂肪,如類脂(磷脂,、糖脂,、膽固醇等),主要分布于細胞內,。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類,,呈中性。中性脂肪是儲存能量的方式之一,,在氧化時釋放出能量,。中性脂肪染色經常采用蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ,、蘇丹Ⅳ,、蘇丹黑B、油紅O法等,。傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料,,近發(fā)現(xiàn)偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色。油紅O是很強的脂溶劑和染脂劑,,較易不甘油三脂結合呈小脂滴狀,,不磷脂結合力稍差,其染色原理一般認為是物理上的溶液作用或吸附作用,,借溶液作用使脂肪染色,。染料在細胞內脂質的溶解度較原溶劑中的溶解度更大,所以在染色時染料就從有機溶劑轉移入脂質而使脂肪染色,。
飽和油紅O染色液(細胞)簡稱ORO染色液,,可顯示小的脂滴,可優(yōu)先為脂類從溶劑中吸附染料,。標本不采用含有乙醇的固定液,,如需要固定可采用10%福爾馬林)。脂肪陽性染色結果呈橘黃至紅色,但具體顏色因脂質濃度而定,。
1.油紅O 1g
異丙醇 100ml
2.油紅O 足量
異丙醇 100ml
配成油紅O飽和溶液,,使用時以油紅O飽和液一份加蒸餾水兩份,過濾后使用,。
二,、染色程序
1.切片用甲醛―鈣固定10分鐘;
2.蒸餾水洗,;
3.60%異丙醇浸洗,;
4.1由紅O染液10分鐘(染液可回收再利用);
5. 60%異丙醇分色至背景五色,;
6.蒸餾水洗,;
7.Mayer蘇木精復染;
8.自來水洗(藍化)1~3分鐘,;
9.蒸餾水洗,;
10.甘油明膠封片。
結果:組織細胞中脂滴呈橘紅色,,核呈藍色,。
油紅O脂類染色澄 顯示大鼠脂肪肝中肝細胞內染為紅色大脂
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