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選擇紫外分光光度計要考慮的因素有哪些

時間:2018-12-25 閱讀:2289
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紫外分光光度計,,是實驗室普及率很高的一種光譜儀器,由于靈敏度高,、選擇性好,、準(zhǔn)確度高、適用濃度范圍廣,,而且分析成本低,、操作簡便、快速得到廣泛的應(yīng)用,,長期在分析領(lǐng)域扮演很重要的角色,。在選擇這類儀器時要考慮哪些因素呢
 
1、光學(xué)構(gòu)造(OPTICAL CONFIGURATION)
 
一般來說,,紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類,。顧名思義,單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測量,。一束給定波長的光通過對照物,,然后再通過實際樣品溶液,就能得到吸光結(jié)果,。
 
雙光束型則是通過一個斬光輪(mirrored chopper wheel)將一束光分成兩束,分別測量對照樣品和實際樣品,??梢孕』馄疲╨amp drift)和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪,而是利用一種光束分光器來代替,,將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品,。因為增加了測量的速度,所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處,。
 
2,、光源和檢測方法(LIGHT SOURCES AND DETECTION)
 
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實驗室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸,、蛋白或者細(xì)菌的生長情況,。例如Amersham Biosciences of Piscataway公司的GeneQuant II能在230、260,、280,、320、595和600nm的波長下測量樣品,。果果需要更大的靈活性,,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析,。
 
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長,,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍,。 Varian of Palo Alto公司的Cary Deep UV和Hitachi High Technologies of Tokyo的U-7000 Automated Vacuum UV System就是這樣的儀器,。
 
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm),。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm),。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
 
分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度,??梢酝渡涑鰧嶒炓蟮墓庾V。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量,??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
 
為了測量吸光值,,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multiplier tubes,,PMTs)和光敏二極管。PMTs提供快速的反應(yīng)時間和良好的靈敏度,,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍,。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
 
3,、樣品類型(SAMPLE FORMAT)
 
在大部分的樣品類型中,,分光光度計可接受樣品孔,、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板,。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實驗室需求,。但盡管對于小實驗室來說,制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實驗時間,。
 
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性,。
 
4,、數(shù)據(jù)管理(DATA MANAGEMENT)
 
大部分單機(jī)型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,,通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,,需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要,。
 
另外一個值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的終使用,。各獨立實驗室都有各自感興趣的實驗結(jié)果。例如一些藥物機(jī)構(gòu)需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價機(jī)構(gòu)的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式,。
 

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