一,、細(xì)胞特性

1. 細(xì)胞名稱：H22細(xì)胞（小鼠肝癌細(xì)胞）
2. 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣,，懸浮生長
3. 含量：>1x10⁶ 個(gè)/瓶
4. 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5. 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

二,、細(xì)胞接收后的處理：
1,、貼壁細(xì)胞

1. 收到T25方瓶細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們（凍存管細(xì)胞收到后直接37℃水浴復(fù)蘇或直接放置于液氮中長期儲(chǔ)存）。
2. 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。
3. 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，換用新鮮的*培養(yǎng)基,。
4. 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,。
5. 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

2,、懸浮細(xì)胞

1. 收到細(xì)胞后,，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們,。
2. 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。
3. 1200rpm離心5min,，棄去15ml離心管中的培養(yǎng)基，細(xì)胞沉淀用新鮮的*培養(yǎng)基重懸并培養(yǎng),。
4. 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,。
5. 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

                      
本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考
一,、H22細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1. 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3. 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。

二,、細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

   對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中,，在1200RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行,，后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X10⁶個(gè)細(xì)胞凍存,。

注意事項(xiàng)：
1. 收到凍存管細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
3. 細(xì)胞用途：僅供科研使用。

發(fā)貨方式：
復(fù)蘇后發(fā)貨：我們復(fù)蘇細(xì)胞后發(fā)貨,，貨期一周左右,，免運(yùn)費(fèi)。（氣溫較好建議復(fù)蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運(yùn)輸）：需額外增加干冰運(yùn)費(fèi),，選擇干冰運(yùn)輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細(xì)胞,，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管。（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）
細(xì)胞發(fā)貨采取專業(yè)的運(yùn)輸包裝,，并選擇快捷的運(yùn)輸方式（順豐速運(yùn)或其他空運(yùn)快遞）
本公司細(xì)胞引種來源：ATCC,、DSMZ、ECACC,、武大細(xì)胞庫,、上海生化細(xì)胞所、中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)等,。