詳細介紹
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
- 準備RPMI-1640培養(yǎng)基,,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
- 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
- 凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
- 細胞處理:
- 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
- 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 將培養(yǎng)瓶中細胞輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,,在1000RPM條件下離心5分鐘,,棄去上清液。
2. 根據(jù)細胞的生長狀態(tài),,按1:2或以上比例用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,,將合適量培養(yǎng)液移入到T-25培養(yǎng)瓶中或T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。