一,、細胞特性

1. 細胞名稱：U251細胞（人膠質瘤細胞）
2. 形態(tài)：成纖維細胞樣,，貼壁生長
3. 含量：>1x10⁶ 個/瓶
4. 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5. 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

二,、細胞接收后的處理：
1、貼壁細胞

1. 收到T25方瓶細胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們（凍存管細胞收到后直接37℃水浴復蘇或直接放置于液氮中長期儲存）,。
2. 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3. 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，換用新鮮的*培養(yǎng)基,。
4. 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5. 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系,。

2,、懸浮細胞

1. 收到細胞后，請檢查是否漏液,，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。
2. 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將15ml離心管置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。
3. 1200rpm離心5min，棄去15ml離心管中的培養(yǎng)基,，細胞沉淀用新鮮的*培養(yǎng)基重懸并培養(yǎng),。
4. 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5. 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系,。

                      
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考
一、U251細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1. 準備H-DMEM培養(yǎng)基,，90%,；優(yōu)質胎牛血清,，10%。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

二,、細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

   對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕吹打后吸出,，移入15ml離心管中,，在1200RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行,，后的重懸液使用血清,。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X10⁶個細胞凍存。

注意事項：
1. 收到凍存管細胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
3. 細胞用途：僅供科研使用,。

發(fā)貨方式：
復蘇后發(fā)貨：我們復蘇細胞后發(fā)貨,，貨期一周左右，免運費,。（氣溫較好建議復蘇后發(fā)貨）
凍存發(fā)貨(干冰運輸）：需額外增加干冰運費,，選擇干冰運輸?shù)奈覀儼l(fā)兩管細胞，為了保證客戶接種可靠性多發(fā)一管,。（氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨）
細胞發(fā)貨采取專業(yè)的運輸包裝,，并選擇快捷的運輸方式（順豐速運或其他空運快遞）
本公司細胞引種來源：ATCC、DSMZ,、ECACC,、武大細胞庫、上海生化細胞所,、中國科學院典型培養(yǎng)物保藏委員會等,。