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采用單四極桿液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)高效快速檢測醫(yī)美樣品中的氨基酸
閱讀：144 發(fā)布時間：2025-2-25前言水光針是一種無創(chuàng),、無痛的微針美容項目，其主要成分通常包含透明質(zhì)酸鈉,、氨基酸和維生素等,。成年人在皮膚表層注射這些活性成分，可實現(xiàn)暫時性補水,，并改善皮膚干燥,、膚色暗沉等面部問題。水光針中添加氨基酸的主要作用是增強對肌膚的保濕和修復(fù),，而氨基酸的含量直接影響產(chǎn)品的效果,。因此準(zhǔn)確測定水光針產(chǎn)品中的氨基酸非常重要。由于氨基酸結(jié)構(gòu)中不含紫外吸收官能團,，因此無法直接通過常規(guī)紫外檢測器進行檢測,。目前很多標(biāo)準(zhǔn)中氨基酸的檢測主要采用衍生法，即,，首先使用衍生化試劑（一般是 OPA,、FMOC 等有紫外吸收的化合物）在堿性條件下對氨基酸進行衍生，得到具有紫外吸收能力的衍生物,，然后用紫外檢測器或者熒光檢測器進行檢測[1-3],。這種方法操作步驟相對復(fù)雜，且可能受到基質(zhì)干擾,。也有標(biāo)準(zhǔn)方法利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)直接進行檢測[4],，雖然能夠減小基質(zhì)干擾，提高選擇性,，但檢測成本較高,，不適用于對醫(yī)美產(chǎn)品的生產(chǎn)進行監(jiān)控。本研究采用液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng),，開發(fā)出一種能夠快速準(zhǔn)確地分析三種氨基酸的方法,，一針運行只需11min。與先前報道的衍生法相比,，本文所述的方法無需衍生步驟,，操作比較簡單；并且該方法抗基質(zhì)干擾能力較強,，具有較高的靈敏度,。
實驗部分試劑和樣品甲醇、乙腈為色譜級,，均購自安譜公司,；乙酸銨為色譜級,，購自Sigma公司；實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水,；氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品及水光針樣品由用戶提供,。儀器和設(shè)備采用與 Agilent InfinityLab LC/MSD iQ（部件號 G6160A）聯(lián)用的 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)，該色譜系統(tǒng)配備如下安捷倫組件：Agilent 1260 Infinity II 四元泵（部件號 G7111B）,、Agilent 1260 Infinity II 自動進樣器（部件號 G7129A）和 Agilent1260 Infinity II 柱溫箱（部件號 G7116A）,。標(biāo)準(zhǔn)溶液制備分別稱取適量脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品,，溶于甲醇中,，配制得到濃度為5500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；然后用甲醇進一步稀釋,，配制得到濃度分別為 1,、5、10,、20,、40μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
樣品前處理取適量水光針樣品,，用甲醇稀釋 10 倍,，離心后，取上清液進樣分析,。色譜條件色譜柱： Amide色譜柱,，4.6×150mm,3.5μm流速： 0.6mL/min進樣量： 10μL柱溫： 30 °C流動相 A： 水流動相 B： 乙腈流動相 C： 0.2mol/L乙酸銨水溶液梯度程序（如表 1）：
結(jié)果與討論本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)建立了脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的檢測方法（如圖 1）,。使用該方法條件檢測三種氨基酸,，在各自特征離子的 SIM 掃描下，獲得了較高的靈敏度,，相互之間為干擾,，有良好的專屬性。同時,，該方法運行時間僅需要11min,，能夠快速完成大批量的樣品分析，獲得較高的樣品分析效率,。
方法精密度取“標(biāo)準(zhǔn)溶液制備"項下的20μg/mL脯氨酸,、丙氨酸和甘氨酸混標(biāo)溶液，重復(fù)進樣 6 次,，計算所得到的保留時間和峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD),，結(jié)果如下（如表 3）。從表中可以看出,，三種氨基酸的保留時間 RSD 均小于 0.02%,，峰面積 RSD 均小于 1.0%,，表明該方法具有較高的精密度。
靈敏度利用所開發(fā)的方法對1μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行分析,，結(jié)果如下（圖 2）所示,。此濃度下的脯氨酸、丙氨酸和甘氨酸的信噪比分別為2456,、2336 和 1061,。以此濃度及信噪比計算檢出限和定量限,，三種氨基酸的結(jié)果如下：以 3 倍信噪比作為檢出限,，則脯氨酸、丙氨酸,、甘氨酸的檢出限分別為1.2ng/mL,、1.3ng/mL、2.8ng/mL,。以 10 倍信噪比作為定量限,，則脯氨酸、丙氨酸,、甘氨酸的檢出限分別為4.1ng/mL,、4.3ng/mL、9.4ng/mL,。上述結(jié)果表明,，采用該方法測定該類型樣品中的三種氨基酸具有較高的靈敏度。
結(jié)論本實驗采用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜系統(tǒng),，建立了醫(yī)美類樣品中脯氨酸,、丙氨酸和甘氨酸的檢測方法。傳統(tǒng)氨基酸測試方法一般采用柱前或柱后衍生的方式,，需要用到特殊的衍生試劑,、專用的色譜柱及流動相體系等，方法的復(fù)雜性較高,，結(jié)果的重復(fù)性以及穩(wěn)定性也存在一定的問題,。本方法與傳統(tǒng)的氨基酸衍生法相比屬于直接測定方法，不存在衍生操作,，具有操作簡便,、選擇性好和靈敏度高的特點，非常適合醫(yī)美類實際樣品中氨基酸的準(zhǔn)確定量,。