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摘要本應(yīng)用簡報(bào)介紹了使用 Agilent 1260 Infinity II 液相色譜與 Agilent Ultivo 三重四極桿 LC/MS (LC/TQ) 的聯(lián)用系統(tǒng)定量分析蜂蜜樣品中的低納克級 2-AFGP,。此方法采用 Ultivo LC/TQ 開發(fā),，該系統(tǒng)體積小巧,，但結(jié)果毫不遜色。此方法是食品行業(yè)在蜂蜜生產(chǎn),、加工和商業(yè)檢測中進(jìn)行常規(guī)分析的理想選擇,，也十分適合用于學(xué)術(shù)研究目的。采用簡單的液液萃取 (LLE) 樣品前處理方法,，能夠成功實(shí)現(xiàn)基質(zhì)中 2-AFGP 的0.005 mg/kg 定量限 (LOQ),。

前言蜂蜜是由蜜蜂生產(chǎn)的一種口味鮮美、營養(yǎng)豐富的食物,，因具有抗氧化,、抗菌和抗炎等特性而被廣泛食用。然而,，由于蜂蜜價(jià)格相對較高,、產(chǎn)量有限、成分復(fù)雜,，經(jīng)常成為摻假的對象,，損害了消費(fèi)者的權(quán)益和生廠商的利益。最常見的蜂蜜摻假行為是在純蜂蜜中添加糖漿,，包括大米糖漿,。此外，給蜜蜂喂食糖漿以提高產(chǎn)量和利潤也是一種間接的摻假行為,。

AFGP（2-乙?；秽?3-吡喃葡萄糖苷，也稱 SMR）是大米糖漿的特異性標(biāo)志物,，可以像其他糖類標(biāo)志物一樣使用穩(wěn)定碳同位素比值法,、脈沖安培檢測法、LC-IRMS（液相色譜-同位素比值質(zhì)譜法）,、紅外光譜法 (IR),、TLC、GC/MS 和NMR 進(jìn)行檢測,。然而,，這些傳統(tǒng)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，有時(shí)還會出現(xiàn)矛盾或假陰性結(jié)果,。三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)是美國,、歐盟、FSSAI 和其他國家/地區(qū)用于確認(rèn)蜂蜜中污染物和摻假物的金標(biāo)準(zhǔn),。本應(yīng)用采用最新款三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng) UltivoLC/TQ,，獲得的靈敏度高于食品監(jiān)督管理局規(guī)定的安全限值要求。

實(shí)驗(yàn)條件本實(shí)驗(yàn)使用乙腈 (Honeywell, LC/MS,34967),、甲醇 ( H o n ey w e l l , LC / M S34966),、水 (Millipore),、甲酸 (Honeywell,LC/MS 56302)、2-乙?；秽?3-吡喃葡萄糖苷（TRC Canada,，部件號 G596874）和安捷倫 0.2 µm PVDF 針頭過濾器（部件號 5191-5924）。儲備液采用甲醇配制,，2-AFGP 工作稀釋液采用水配制,。萃取取 1 g 蜂蜜進(jìn)行樣品前處理。步驟如下：用水稀釋,，離心,，將上清液過濾后進(jìn)樣至LC/MS（萃取成本更低）。詳細(xì)流程如圖 2 所示,。

儀器本實(shí)驗(yàn)使用的儀器包括 Agilent 1260Infinity II 四元泵 (G7104C),、Agilent1260 Infinity II 樣品瓶進(jìn)樣器 (G7129C)、Agilent 1260 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116A),、配備 AJS 離子源的 UltivoLC/TQ (G6465B),。LC 和 MS 參數(shù)如表 1和表 2 所示。

結(jié)果與討論從預(yù)加標(biāo) 0.05 mg/kg (50 ppb) SMR 的蜂蜜樣品和空白蜂蜜萃取物的 MRM 圖中可以看出,，SMR 很容易檢出（圖 3）,。印度食品安全指南 (FSSAI) 規(guī)定的檢測濃度為 1 mg/kg，而使用 Ultivo LC/TQ 的方法 LOQ 為 0.005 mg/kg,。此外,，通過進(jìn)樣各種 SMR 濃度下的蜂蜜樣品，獲得了可重現(xiàn)的洗脫曲線,，如圖 4 所示,。