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安捷倫6470液質(zhì)聯(lián)用檢測豆瓣醬和蠔油中的對(duì) 羥基苯甲酸酯
閱讀：288 發(fā)布時(shí)間：2024-11-28摘要：本文介紹了分別使用 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (LC-MS/MS) 和 1200 LC-DAD檢測蠔油和豆瓣醬中 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的分析方法,，采用兩種檢測器可滿足不同檢測限和定量限的要求,。色譜柱使用 Agilent Poroshell 120 EC-C18,，實(shí)現(xiàn)了 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的良好分離，前處理使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒對(duì)蠔油和豆瓣醬基質(zhì)進(jìn)行凈化,，過程簡便,、快速,。分別采用 LC-MS/MS 和 LC-DAD 進(jìn)行檢測時(shí)，方法檢測限分別為 5 μg/kg 和 0.5 mg/kg,，定量限分別為 10 μg/kg 和 1 mg/kg,。在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)各分析物的線性相關(guān)系數(shù)均大于 0.99。在蠔油和豆瓣醬中相應(yīng)加標(biāo)濃度下,，7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%,，準(zhǔn)確度和精密度良好，可用于豆瓣醬和蠔油等調(diào)味品中對(duì)羥基苯甲酸酯類的分析檢測,。
前言對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物是具有防腐作用的添加劑,，可有效防止霉菌、酵母菌和細(xì)菌的生長,。由于不同的酯抑制細(xì)菌的能力有所不同,，因此在烘焙食品、調(diào)味品,、果汁和果凍等食品中常用由不同酯類組成的復(fù)配型防腐劑,。在我國，GB 2760-2014[1] 規(guī)定,，對(duì)羥基苯甲酸酯類及其鈉鹽在調(diào)味品（如醬油,、醋、蠔油等）中的最大使用量為 0.25 g/kg（以對(duì)羥基苯甲酸計(jì)）,，而有些國家/地區(qū)（如馬來西亞）則禁止使用,，因此針對(duì)不同國家/地區(qū)的規(guī)定有必要建立滿足不同檢測限要求的分析方法。關(guān)于食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物的檢測,，GB/T 5009.31-2016[2]規(guī)定使用配備 FID 的氣相色譜系統(tǒng)進(jìn)行檢測,。該方法需要首先將樣品中的對(duì)羥基苯甲酸酯用鹽酸酸化；并用乙mi多次重復(fù)提取,，用飽和氯化鈉溶液和碳酸氫鈉溶液多次洗滌,；濃縮近干后,，用乙醇復(fù)溶,；然后進(jìn)樣分析。樣品前處理過程復(fù)雜,、耗時(shí)，且溶劑消耗量大,。SN/T 4047-2014[3] 規(guī)定的樣品前處理方法則是：用乙腈多次提取,，氮吹后用 35% 甲醇水定容；然后經(jīng) LC-C18 固相萃取柱凈化,，再次氮吹后用甲醇定容,。該方法氮吹步驟多,，同樣存在耗時(shí)較長的弊端。
本應(yīng)用選擇 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯類防腐劑（結(jié)構(gòu)和 LogP 值見圖 1）作為目標(biāo)化合物,，以兩種比較復(fù)雜的典型調(diào)味品（即蠔油和豆瓣醬）為研究基質(zhì),，使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 進(jìn)行凈化，并分別采用高靈敏度 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (LC/MS/MS) 和 1200 LC-DAD 進(jìn)行檢測,，該方法樣品前處理過程簡單,、快速和高效，可適用不同的檢測需求,。
實(shí)驗(yàn)部分試劑和樣品實(shí)驗(yàn)用乙腈,、甲醇均為色譜純，購于北京迪馬科技有限公司,；實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水,。7 種對(duì)羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 (BePure) 購于曼哈格公司，濃度均為1000 µg/mL 且以甲醇為溶劑,。蠔油 和豆瓣醬樣品為市售產(chǎn)品,。標(biāo)準(zhǔn)品制備分別取適量對(duì)羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成濃度為100 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,，逐級(jí)稀釋后備用,。校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：準(zhǔn)確移取適量的上述標(biāo)準(zhǔn)工作液，用乙腈稀釋,，分別得到濃度為 1,、5、10,、50,、 100、200 和 500 ng/mL的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液和濃度為 0.2,、0.5,、1、2,、5,、10、50 和100 μg/mL 的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)工作液,，分別進(jìn) LC-MS/MS 和 LC-DAD 檢測,。臨用現(xiàn)配。
樣品前處理稱取 5 g（精確至 0.01 g）樣品于 50 mL 聚丙烯離心管中,，加入陶瓷均質(zhì)子,；然后加入 5 mL 水和 10 mL 乙腈，渦旋振蕩 5 min；加入 Bond Elut QuEChERS EN 萃取試劑盒（部件號(hào) 5982-5650）,，渦旋振蕩 2 min,，再以 8000 r/min 離心 5 min；取 6 mL 上清液,，加入 Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒（部件號(hào)5982-5158）中,，渦旋振蕩 2 min，再以 8000 r/min 離心 5 min,；過 0.2 μm 尼龍微孔濾膜,，待測。
MS 條件儀器配置： Agilent 6470 三重四極桿質(zhì)譜儀（部件號(hào) G6470B）離子源模式： ESI (-)干燥氣溫度： 250 °C干燥氣流速： 7 L/min鞘氣溫度： 350 °C鞘氣流速： 12 L/min霧化器壓力： 40 psi毛細(xì)管電壓： 3000 V（負(fù)）掃描模式 ： MRM（具體參數(shù)見下表 1）
結(jié)論本應(yīng)用使用 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱實(shí)現(xiàn)了 7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的分離,，并分別采用 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (LC-MS/MS) 和 LC-DAD 進(jìn)行檢測,，建立了可適用于不同檢測限和定量限要求的方法。使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 試劑盒對(duì)蠔油和豆瓣醬基質(zhì)實(shí)現(xiàn)了高效的凈化,，比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法中的樣品前處理過程更加簡便,、快速。使用 LC-MS/MS 進(jìn)行檢測時(shí),，在 1–500 ng/mL 的濃度范圍內(nèi)各目標(biāo)分析物的相關(guān)系數(shù)均大于 0.99,；方法檢測限為 5 μg/kg，定量限為 10 μg/kg,，在蠔油和豆瓣醬中加標(biāo)濃度為 10–50 μg/kg 時(shí),，7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 70.1%–105.8% 和1.5%–14.7%，表現(xiàn)出良好的準(zhǔn)確度和精密度,。使用 LC-DAD 檢測時(shí),，在 0.2–100 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)各目標(biāo)分析物的相關(guān)系數(shù)均大于 0.99；方法檢測限為 0.5 mg/kg,，定量限為 1 mg/kg,，在蠔油和豆瓣醬中加標(biāo)濃度為 1–10 mg/kg 時(shí)，7 種對(duì)羥基苯甲酸酯的平均加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 74.7%–100.6% 和1.0%–3.9%,，同樣表現(xiàn)出良好的準(zhǔn)確度和精密度,。兩種檢測方法均適用于調(diào)味品蠔油和豆瓣醬中對(duì)羥基苯甲酸酯的定量分析。