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三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀對雞肉中抗病毒類藥物金剛烷胺和利巴韋林進行分析
閱讀：706 發(fā)布時間：2021-12-6摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)/6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立 了同時檢測抗病du藥物金剛烷胺 (Amantadine) 和利巴韋林 (Ribavirin)的分析方 法,。雞肉樣品經(jīng)提取金剛烷胺和利巴韋林后，分別采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱凈化,，采用薄殼型填料反相 C18 色譜柱 — Agilent Poroshell 120 SB-Aq 色譜柱分離,，經(jīng)配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的安捷倫三重四極 桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)在正離子模式下監(jiān)測。該方法在 0.1-50 ng/mL 濃度范圍內(nèi)線性相 關(guān)性良好,，相關(guān)系數(shù) R2 ≥ 0.999,；利巴韋林的添加回收率在 80%-101%、金剛烷胺 的添加回收率在 71%-79%,。通過對方法靈敏度,、精密度和線性范圍等方法學(xué)參 數(shù)進行考察，得到所建立的方法能在 12 min 內(nèi)對 2 種抗病du藥物金剛烷胺和利 巴韋林完成快速,、高靈敏度的檢測分析,，*法規(guī)監(jiān)測要求。
前言：2013 年底央視曝光山東等地部分養(yǎng)殖戶在肉雞飼養(yǎng)過程中大量濫用抗生素,、激 素和抗病毒類藥物,，違規(guī)喂食金剛烷胺、利巴韋林等抗病du藥品的“速成雞" 流入上海百盛旗下餐飲機構(gòu)一事,。美國快餐業(yè)*肯德基和麥當(dāng)勞在中國被卷 入“速成雞"風(fēng)波,，引發(fā)上海人士和全國消費者的廣泛關(guān)注和擔(dān)憂！農(nóng)業(yè)部對 此事件高度重視,，及時責(zé)成山東有關(guān)部門去調(diào)查處理這件事情,，也派出了專家 組奔赴山東。以往文獻報道采用 LC/QQQ 分析血漿中利巴韋林或動物源食品中金 剛烷胺[1-3],，但沒有此次事件中被曝光的抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺同時 檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)和方法,，這為相關(guān)政府執(zhí)法檢測部門、生產(chǎn)企業(yè)和第三方實驗 室迅速開展監(jiān)督檢查帶來了技術(shù)上的困難,。
安捷倫科技作為分析儀器業(yè)界品牌,，多年來一直致力 于為食品安全領(lǐng)域提供強有力的產(chǎn)品、技術(shù),、解決方案,。 為應(yīng)對此次食品安全突發(fā)事件，安捷倫科技為廣大分析工 作者提供了分析檢測雞肉中抗病毒類藥物利巴韋林和金剛 烷胺的完整解決方案,。
實驗部分 試劑,、化學(xué)品與消耗品 所有試劑和溶劑均為色譜純級或者分析純級。甲醇,、乙 腈和異丙醇購自德國默克 (MERCK),。甲酸,、乙酸銨、三lv乙酸和氨水購自美國 Sigma-Aldrich 公司,。所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水,。金剛烷胺 和利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)品由北京出入境檢驗檢疫局技術(shù)中心提供。 所有標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制為 1 mg/mL 儲備液,，儲存在 -20 °C 冰 箱內(nèi)（有效期 1 年左右）,。用乙腈:水 (50:50) 配制混合工作液 (10 µg/mL)，儲存在 4 °C 下（有效期半個月左右）,。使用時 用水對混合工作液進行適當(dāng)逐級稀釋后使用,，現(xiàn)配現(xiàn)用。 實驗采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱對樣品提 取液進行凈化,。
儀器配置 實驗采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)進行分離,，其由 下列部件組成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 標(biāo)準(zhǔn)自動進樣器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自動進樣器冷卻器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 采用配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的 Agilent 6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，在正離子模式下進行檢測,。 采用 Agilent MassHunter 工作站軟件（B.07 或以上版本）進 行數(shù)據(jù)采集,、定性和定量分析。 樣品前處理 稱取 2 g 雞肉樣品（精確至 0.01 g）至 15 mL 離心管中,，依次 加入已知濃度的混合工作液,、5 mL 的甲醇:1% 三氯yi酸水溶 液（50:50，V/V）,，渦旋 30 s,，超聲 30 min，5000 r/min 離心 10 min,，上清液全部轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管中,；再加入 5 mL 的 甲醇:1% 三氯yi酸（50:50，V/V）重復(fù)提取一次,，合并全部 提取液,；渦旋均勻后重新離心，取出 5 mL 上清液,，過 PCX 和 PBA 固相萃取柱進行凈化,，流程圖如圖 1 所示。
結(jié)果與討論 本文采用含有薄殼型填料顆粒的 Poroshell 120 SB-Aq 色譜 柱對利巴韋林和金剛烷胺進行了有效的色譜分離,。流動相 中添加 0.1% 甲酸和 5 mmol/L 乙酸銨可以促進正模式下的 離子化效率。根據(jù)利巴韋林和金剛烷胺的結(jié)構(gòu),，實驗可以 采用電噴霧離子源正離子模式測試,。實驗結(jié)果表明，利巴 韋林可以生成 [M+H]+ (m/z 245.1) 和 [M+Na]+ (m/z 267.1) 分 子離子峰,，金剛烷胺可以生成 [M+H]+ (m/z 152.2) 分子離子 峰,；分別選擇 [M+H]+ 峰進行子離子掃描,，最終確認(rèn)利巴韋 林選擇 m/z 113（定量子離子）和 96（定性子離子）、金剛 烷胺選擇 m/z 135（定量子離子）和 93（定性子離子）作為 多反應(yīng)通道監(jiān)測離子對,，所得 MRM 譜圖如圖 2 所示,。 在雞肉樣品基質(zhì)中含有對利巴韋林色譜峰有干擾的物質(zhì)， 影響結(jié)果測定,。實驗發(fā)現(xiàn)采用 SB-Aq 類型柱填料的色譜柱 在 100% 水相流動相條件下起始,，可以實現(xiàn)干擾物與利巴韋 林的基線分離，避免定性定量的干擾,，如圖 3 所示,。實驗 發(fā)現(xiàn)采用 PCX 固相萃取柱對金剛烷胺凈化時，洗脫液中必 須添加 25% 以上的異丙醇才能解吸下來,。
結(jié)論 采用 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)/6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)成功的實現(xiàn)了對雞肉中抗病毒類藥物金剛烷胺和利巴 韋林殘留量的高靈敏,、快速的確證定量分析。本方法采用 Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱有效的實現(xiàn)了樣品的凈化,。 本文所述完整的解決方案可以滿足對雞肉制品中抗病物的快速監(jiān)督和監(jiān)測,。