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使用高效液相色譜法測定動物源食品中的氮哌酮及其代謝物殘留
閱讀：656 發(fā)布時間：2021-12-3前言:氮哌酮 (Azaperone) 是一種丁酰苯類神經(jīng)安定藥,，動物經(jīng)肌肉注射此藥后可消 除緊張感,、降低活動力，使動物對環(huán)境淡漠并長期處于安靜狀態(tài),，在長途運輸 中常常給豬等動物使用該藥,。氮哌醇 (Azaperol) 是氮哌酮在動物體內(nèi)的代謝產(chǎn) 物，與原形藥物氮哌酮的化學結(jié)構相近,。通過食物鏈,，氮哌酮及其代謝產(chǎn)物氮 哌醇會在人體內(nèi)蓄積，對人體產(chǎn)生直接的危害,，其不良反應主要體現(xiàn)為心血管 效應,，用藥后動脈壓下降，皮膚血管擴張使皮膚成粉紅色,，心率和心輸出量 減少,。 本文所述方法參照 GB29709-2013,，建立了動物源食品中氮哌酮及其代謝物分析 的高效液相色譜法。本方法適用于豬的肌肉,、肝,、腎中氮哌酮和氮哌醇殘留量 的檢測。方法利用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱對樣品進行凈化,，并 利用安捷倫的 Agilent Poroshell 120 EC-C18 快速柱對目標物進行快速分析,。
氮哌酮及其代謝物分析 對試樣進行樣品前處理：稱取 5 ± 0.05 g 試樣于 50 mL 離心管中，加 10 mL 乙腈,， 渦旋 1 min,，超聲 10 min，5000 r/min 離心 5 min,，取上清液于 50 mL 離心管中； 殘渣中加 10 mL 乙腈,，重復提取一次,，合并兩次提取液，于 45 °C 氮氣吹掃至近 干,；加 5 mL 2% 甲酸水溶液于離心管中,，渦旋 1 min，超聲 5 min 使充分溶解,，加 10 mL 正己烷,，振蕩 5 min，5000 r/min 離心 5 min,，棄掉上層正己烷層（包含兩相 間的脂肪膜）,，用氮氣吹掃去除殘余的正己烷，備用,。
所得樣品提取液經(jīng) Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱 凈化和富集后（圖 1 所示為固相萃取操作流程）,，使用配備 了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜柱的高效液相色譜系統(tǒng) 對其中的氮哌酮及其代謝物進行快速分析（表 1 所示為高 效液相色譜分析條件）。
本方法在 GB29709-2013 基礎上進行了前處理和檢測方法 的優(yōu)化,，在保證目標物回收率的情況下,，顯著降低了各種 組織來源的本底干擾，能獲得更低的檢測限,，同時使分析 方法更加穩(wěn)定準確,，如圖 2-4 所示。方法中利用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱對樣品進行凈化,，并利用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱對目標物進行快速分析,， 方法檢測限為 2 µg/kg，定量限為 5 µg/kg,；50 µg/kg 加標 水平的豬腎樣品連續(xù)進樣六次考察重現(xiàn)性,，氮哌醇峰面積 RSD 值為 0.76%,，氮哌酮峰面積 RSD 值為 0.53%，結(jié)果表現(xiàn) 出*的重現(xiàn)性,，如圖 5 所示,；在 12.5-1000 ng/mL 線性范 圍內(nèi)氮哌醇和伊氮哌酮的線性相關性良好，如圖 6 所示,； 在 5-100 µg/kg 的加標水平下,，氮哌酮和氮哌醇的回收率為 58.9%-83.8%，RSD 為 0.9%-7%,，如表 2-3 所示,。
本方法與 GB 29709-2013 相比，采用了 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱對樣品進行凈化,，并利用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱對目標物進行快速分析,。Plexa PCX 填料是新型的高級聚合物陽離子交換填料，具有更高 的萃取效率,。Poroshell 120 EC-C18 快速柱與常規(guī)分析柱相比,， 在提高柱效的同時顯著地縮短了分析時間，這在高通量檢 測方面有重要意義,。本方法簡化了萃取凈化的步驟,，提高了前處理和色譜分析效率，*國家標準方法要求的 檢測限和定量限,，獲得了較高的回收率與穩(wěn)定性,。因此采 用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱和 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱，能夠滿足 GB29709-2013 規(guī)定的對動物源食品中氮 哌酮及其代謝物的測定要求,。