化工儀器網(wǎng)
技術文章
使用 Agilent色譜柱快速檢測銀杏葉軟膠囊中的槐角苷
閱讀：933 發(fā)布時間：2021-1-21摘要：本文介紹了用于普通 HPLC上的快速液相分析方法,。文中使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 色譜柱分析槐角苷對照品及銀杏葉提取物制品，目標物峰形良好,，能夠有效 與樣品中的雜質(zhì)分離,，得到準確的測定結果。同時與采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 色譜柱的 常規(guī)方法進行對比,，本方法經(jīng)過簡單的方法轉(zhuǎn)換,，即可縮短約 60% 的分析時間。該方法 適用于銀杏葉提取物中槐角苷的快速,、高效分析,。
前言： 銀杏葉中主要活性成分為黃酮類化合物，具有一定的擴血管作 用,，可輔助治療心腦血管疾病,。市場上有各種銀杏制品，銀杏葉 片,、軟膠囊和滴丸皆為常見的銀杏葉提取物制品,。但銀杏中還含 有有毒的銀杏酸，在提取工藝中需盡可能減少銀杏酸成分含量,。 為了保證銀杏葉制品的質(zhì)量,，《中國藥典》中明確規(guī)定了銀杏葉 提取物檢測總黃酮醇苷含量及銀杏酸*,。其中總黃酮醇苷的含 量，由分別測得的槲皮素含量,、山柰素含量及異鼠李素含量按照 公式換算獲得,。 槐角提取物中同樣含有槲皮素、山柰素及異鼠李素,，并且不含有 毒成分銀杏酸,。但從銀杏葉與槐角兩味藥材在《中國藥典》中的 描述看到，兩者功效不同,。在生產(chǎn)過程中存在以槐角苷提取物代 替銀杏葉提取物的現(xiàn)象屬于摻假行為,，而原有方法無法區(qū)分。 中國食品藥品檢定研究院研究制定了多個有關銀杏葉制品的檢 測方法,，并發(fā)布了《銀杏葉軟膠囊中槐角苷檢查項補充檢查方 法》,。此方法采用 Agilent 5 TC-C18 (2) 色譜柱（4.6 × 250 mm， 5 μm,，部件號 588925-902）,，簡單有效，可準確測定槐角苷的 含量,。 本文在此基礎上開發(fā)了快速液相色譜方法,，采用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 色譜柱（4.6 × 100 mm，2.7 μm,，部件號 685975-902）,，在 20 min 內(nèi)完成分析，大大縮短分析時間,。同時 兼容常規(guī)液相色譜系統(tǒng),，可在普通液相色譜系統(tǒng)上實現(xiàn)快速分析 需求
實驗部分：儀器與試劑 采用 Agilent 1260 Infinity 液相色譜系統(tǒng)，配備如下安捷倫模塊： 四元泵（部件號 G1311A）,、自動進樣器（部件號 G1367D）,、柱 溫箱（部件號 G1316A）、二極管陣列檢測器（部件號 G4212A）,。 色譜柱選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18（4.6 × 100 mm, 2.7 μm,，部件號 685975-902）。 甲醇,、乙腈,、磷酸為色譜純級，購于迪馬公司,；所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水,；槐角苷對照 品購于中國藥品生物制品檢定所；樣品為市售產(chǎn)品,。 槐角苷對照品溶液配置 取槐角苷對照品適量,，精密稱定,，加 80% 甲醇水溶液制成每 1 mL 含 20.0 μg 槐角苷對照品的溶液，作為對照品溶液,。 樣品前處理 取約相當于總黃酮醇苷 9.6 mg 的樣品粉末,，精密稱定,，置于 具塞錐形瓶中,，精密加入 80% 甲醇水溶液 20 mL，密塞,，稱定 重量,，超聲處理 20 min。取出,，放冷,，再稱定重量，用 80% 甲醇溶液補足減失的重量,，搖勻,，過濾。取續(xù)濾液,，待測,。 液相色譜條件 色譜柱： InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 流速： 1.0 mL/min 進樣量： 4 μL 柱溫： 40 °C 流動相： A) 0.4% 磷酸水溶液 B) 乙腈 C) 甲醇 梯度程序： 時間 (min) A% B% C% 0.0 77 8 15 8.0 67 8 25 16.0 42 8 50 16.1 77 8 15 20.0 77 8 15 檢測器：260 nm
結果與討論：按照本文所述實驗方法，使用 InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 色譜柱,，對銀杏葉軟膠囊中的槐角苷進行分析,，分析結果滿足分 離及檢測要求，槐角苷對照品溶液和樣品溶液的色譜圖如圖 1,、2 所示,。 其中，兩個待測樣品中二號樣品為已知陽性樣品,，一號樣品為未 知樣品,。按照《銀杏葉軟膠囊中槐角苷檢查項補充檢查方法》中 結果判斷方法，使用槐角苷對照品定位,，并比對 210-400 nm 波 長范圍內(nèi)的紫外光譜圖,，二號樣品判定為陽性檢出，與已知結果 一致,；一號樣品中保留時間相同的色譜峰,，由于光譜圖不同（槐 角苷在 259 nm 顯示大吸收），判定為合格產(chǎn)品,，對照品溶液,、 樣品溶液的疊加光譜圖如圖 3 所示。 通過進一步對比常規(guī)柱方法和本文所述快速方法的色譜圖得到,， 在保證分離及檢測要求的前提下,，快速方法可在 20 min 內(nèi)完成 分析,，縮短了約 60% 的分析時間，如圖 4 所示,。
結論 ：此方法使用采取表面多孔層填料技術的 Poroshell 色譜柱,，利用 其柱效與亞二微米填料相當?shù)奶攸c，在滿足分離度的基礎上,，達 到快速分析的效果,。同時 Poroshell 色譜柱的壓力大約只有亞二 微米填料的 50%，可應用于 UHPLC 和常規(guī) HPLC 系統(tǒng)上,。 本文隨機選取兩個不同廠家的銀杏葉軟膠囊,，按照建立的快速方 法檢測。由實驗結果看出,，Poroshell 120 SB-C18 能夠提供較好 的分離及良好的峰形,，滿足方法中柱效不低于 40000 的要求。且 方法分析周期 20 min,，縮短了約 60% 的分析時間,，大大提升分析 效率。此外,，本文所述方法操作簡便,，可準確測定槐角苷的含量。