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使用Ultivo三重四極桿液質(zhì)分析測(cè)定人血清中的睪酮
閱讀：657 發(fā)布時(shí)間：2021-1-12前言：本研究開發(fā)出一種使用微型 Agilent Ultivo 三重四極桿 LC/MS 定量分析血清中游離睪酮的穩(wěn)定,、靈敏且相對(duì)快速的分析方法。Ultivo 設(shè)計(jì)用于解決常規(guī)分析實(shí)驗(yàn)室所面臨的許多挑戰(zhàn),。本研究的目的在于評(píng)估這種新型三重四極桿質(zhì)譜儀 (MS) 如何用于分析受研究關(guān)注的典型內(nèi)源性分析物1 ,。Ultivo 采用的創(chuàng)新技術(shù)使安捷倫能夠減小儀器體積，同時(shí)達(dá)到與類似大型質(zhì)譜系統(tǒng)相當(dāng)?shù)姆治鲂阅芩?。VacShield 真空盾,、 Cyclone Ion Guide 氣旋離子導(dǎo)桿、十二極桿 Vortex Collision Cell 渦旋碰撞室和小型雙曲面四極桿等儀器創(chuàng)新旨在大程度提高微型儀器的定量分析性能,，并提高儀器可靠性和穩(wěn)定性,。 Ultivo 減少了用戶對(duì)系統(tǒng)維護(hù)的干預(yù)，使非專業(yè)質(zhì)譜用戶能夠從容應(yīng)對(duì)系統(tǒng)運(yùn)行和維護(hù),。Agilent MassHunter 軟件簡(jiǎn)化了數(shù)據(jù)采集,、方法設(shè)置、數(shù)據(jù)分析和報(bào)告,，獲得了從采集到報(bào)告的短時(shí)間,，提高了實(shí)驗(yàn)室分析效率。本研究概述了使用 Ultivo 三重四極桿 LC/MS 得到的人血清中游離睪酮的典型確認(rèn)性能,，概述了定量下限,、色譜精度、校準(zhǔn)線性,、范圍和準(zhǔn)確度,。
化學(xué)品與試劑用于基質(zhì)匹配校準(zhǔn)品的人血清購(gòu)自 Golden West Biologicals (Temecula, CA)。標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)購(gòu)自 Cerilliant Corporation (Round Rock, TX),。樣品前處理和液相色譜溶劑購(gòu)自 SigmaAldrich (St. Louis, MO) 和 Honeywell Riedel-de Haën (Seelze, Germany),。
樣品前處理通過(guò)在陰性人血清中加標(biāo)睪酮獲得高濃度樣品，然后通過(guò)用潔凈血清連續(xù)稀釋制得低濃度樣品,。使用 500 µL 乙腈通過(guò)蛋白質(zhì)沉淀對(duì) 250 µL 各種樣品進(jìn)行提取,。將樣品渦旋混合 1 分鐘,，然后以 10000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 4 分鐘。在引入液相色譜系統(tǒng)中之前,，用 500 µL 水對(duì) 500 µL 上清液進(jìn)行稀釋,。制備濃度范圍為 0.001–100 ng/mL 的 11 點(diǎn)校準(zhǔn)曲線標(biāo)樣，重復(fù)三次,。將足量的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液直接加入每種基質(zhì)標(biāo)樣和校準(zhǔn)品中,，使進(jìn)樣分析的所有類型樣品均獲得 25 ng/mL 的一致濃度。數(shù)據(jù)分析采集數(shù)據(jù)并用 Agilent MassHunter 軟件包 C.01.00 版對(duì) Ultivo 采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,。利用 Agilent MassHunter Acquisition Optimizer 軟件獲得 MS/MS 離子對(duì),，以確定母離子和子離子、碎裂電壓和碰撞能量,。進(jìn)樣各種化合物或內(nèi)標(biāo)的純?nèi)芤海舛葹?1000 ng/mL,，在流動(dòng)注射模式下進(jìn)樣量為 2 µL）后，即完成分析步驟,。
結(jié)果與討論：線性睪酮分析物的校準(zhǔn)濃度范圍為 1 pg/mL 至 100 ng/mL,。利用 1/x 的加權(quán)因子得到睪酮化合物在整個(gè)濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出線性效應(yīng)，在 n = 3 的條件下,，R2 值高于 0.999,。由三批樣品得到的精度數(shù)據(jù)表明，在所有校準(zhǔn)濃度下,，%RSD 變化小于 5%,。
結(jié)論：本研究項(xiàng)目表明，Agilent Ultivo 三重四極桿 LC/MS 能夠在 6 分鐘的分析周期內(nèi)使人血清中濃度在 1 pg/mL 至 100 ng/mL 范圍內(nèi)的游離睪酮分析得到優(yōu)異的線性,、精度和分析靈敏度,。未來(lái)的工作中，需要評(píng)估不同供應(yīng)商來(lái)源的血清和血液基質(zhì)對(duì)這種分析方法的潛在干擾,，以及通過(guò)更多樣品前處理技術(shù)配制 LC/MS 分析樣品的影響,。