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關(guān)于何時使用HILIC 與反相液相色譜柱的詳細研究
閱讀：1097 發(fā)布時間：2020-6-16摘要：本研究考察了何時使用親水相互作用液相色譜 (HILIC) 以及何時使用反相液相色譜(RPLC) 柱分析難以保留的極性小分子和離子化分子,。所示數(shù)據(jù)表明了分析物/樣品,、流動相,、檢測模式和其他方法適用性要求（保留性、分離度,、靈敏度和峰形）的影響,。
前言： 使用反相液相色譜法充分保留和分離極性 小分子是一項具有挑戰(zhàn)性的任務。烷基固 定相液相色譜柱（例如 C18）通常是液相 色譜方法開發(fā),。然而,，高極性分析 物對非極性 C18 固定相的親和力較低， 保留性較差,。我們可以探索幾種能夠在反 相模式下保留這些化合物的技術(shù),，例如， 向流動相添加離子對試劑或?qū)Ψ治鑫镞M行 衍生化,。離子對試劑會污染液相色譜柱和 系統(tǒng),，一般不適用于 LC/MS。通常也不 建議采取衍生化操作,，因為這是一個繁瑣 的額外步驟,，會增加樣品的前處理時間， 并可能導致錯誤和重現(xiàn)性問題。
要想成功地保留和分離極性分析物,，一個更好的做法是探索各種固定鍵合相,。部分鍵合相非常適合棘手的極性分析物。在反相模式下,，存在極性更高的鍵合相,，它們使極性分析物與固定相之間的相互作用變得更強。其中許多固定相也可用于非常弱的流動相,，如 100% 水相,，從而更好地保留極性化合物。除了反相鍵合相,，市面上還有幾種親水相互作用液相色譜 (HILIC) 柱固定相,。HILIC 模式使用極性固定相保留極性化合物,。在給定的分析中,，哪一種色譜柱和哪一種液相色譜模式是選擇，可由其他方法因素決定,，包括分析物溶解度,、流動相和檢測模式。
現(xiàn)代液相色譜柱通常填充表面多孔顆粒填 料,，這種填料以其在低反壓下的高柱效而 聞名,。高柱效有助于分離相鄰洗脫峰，而 低反壓使液相色譜儀更具靈活性,。 本研究展示了一種合乎邏輯的逐步式方 法,，使化學家能夠利用表面多孔顆粒填料 液相色譜柱實現(xiàn)對極性分析物的保留、分離和檢測,。
實驗部分：本實驗采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)與 Agilent Ultivo LC/TQ,。對標準配置的系統(tǒng)進行了改進，以減小系統(tǒng)體積和擴散,。表 1 示出了配置詳情,。
結(jié)論：找到能保留和分離所有分析物的色譜柱。 • RPLC 不能保留所有極性/離子化分析物,；HILIC 可能適用于這些分析物 • 某些分析物在這兩種液相色譜模式下均可實現(xiàn)同樣出色的保留和分離考慮樣品：分析物溶解度和樣品溶劑,。 • 在 RPLC 和 HILIC 中進樣強溶劑，均會對色譜分析質(zhì)量產(chǎn)生不利影響 • 隨著進樣量的增加,，強溶劑影響更嚴重 • 相比乙腈,，極性化合物通常更易溶于水，這對 RPLC 是有利的
可使用哪種檢測器,？ • 確保分析物與所選檢測器兼容,，并且滿足靈敏度要求 • HILIC 可以改善 LC/MS 分析，因為流動相更易揮發(fā) • UV 和 RPLC 與多種流動相兼容，這可以改善分析物的保留和分離特性選擇 HILIC 還是 RPLC 是一種平衡考量,，需要仔細考慮色譜分離要求,、分析物極性和溶解度、樣品溶劑的性質(zhì)以及可用的檢測方式,。